[发明专利]转基因蛋白CP4EPSPS的上转换‑免疫层析试纸条及检测方法

说明书

技术领域

本发明属于转基因检测技术领域，尤其是涉及一种转基因蛋白CP4EPSPS的上转换-免疫层析试纸条及检测方法。

背景技术

随着科技的发展，转基因产品在我们身边并不少见，尤其是转基因粮食及其衍生产品，CP4EPSPS被应用于多种作物的转基因研究中，包括玉米、大都、棉花、油菜、甜菜和苜蓿。随着各种各样的转基因食品进入市场，转基因食品的安全性受到人们的日益关注，世界各国对转基因食品的安全性存在着较大的正义，日本、欧盟等地区制定了相关法规对转基因食品进行了严格的管理。因此，转基因蛋白的检测逐渐成为研究热点之一。由于转基因检测的特殊性，要求检测方法必须简单、快速，而且成本要低。目前转基因蛋白CP4EPSPS的检测方法主要实用实时定量PCR手段，由于PCR方法学的可靠性取决于DNA的完整性，但是在实验处理的过程中DNA容易发生降解，因此，该方法存在一定的局限性。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在提出一种转基因蛋白CP4EPSPS的上转换-免疫层析试纸条及检测方法，以实现转基因蛋白CP4EPSPS的简单、快速、低成本的试纸条检测方法。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种检测转基因蛋白CP4EPSPS的上转换-免疫层析试纸条，所述试纸条包括样品垫、结合垫、分析膜、吸水垫，所述样品垫与结合垫为玻璃纤维素膜，所述分析膜为硝酸纤维素膜，所述吸水垫为纤维素膜，所述分析膜上设有检测线和质控线，所述样品垫、结合垫、吸水垫依次粘贴在PVC板上；

所述结合垫上固定有上转换发光纳米粒子-转基因蛋白CP4EPSPS单抗1结合物，所述分析膜上的检测线固定有转基因蛋白CP4EPSPS单克隆抗体2，所述质控线固定有二抗。

进一步的，所述样品垫、结合垫、分析膜、吸水垫依次以重叠1～2mm的间距交互层叠黏贴到PVC板上，所述试纸条的宽度为4mm。

检测转基因蛋白CP4EPSPS的上转换-免疫层析试纸条的制备方法包括以下步骤：

(1)NaYF₄:Yb,Tm/NaYF₄上转换纳米粒子的制备；

(2)NaYF₄:Yb,Tm/NaYF₄的高分子的包覆；

(3)上转换纳米粒子标记抗体；

(4)上转换免疫层析法的试纸条的制作；

(5)结合物溶液的配置和包被；

(6)质控溶液和检测溶液的配置和包被；

(7)双抗体夹心模式UCPs-ICA定量检测转基因蛋白CP4EPSPS；

进一步的，所述步骤(1)NaYF₄:Yb,Tm/NaYF₄上转换纳米粒子的制备方法如下：

S1：NaYF₄:Yb,Tm的制备

往三口烧瓶中加入2～5mL油酸，再加入1.2～3mmol稀土离子氯化物晶体粉末，控制各种稀土元素的摩尔比例为Y:Yb:Tm＝60％:25％:4％。在稀有气体氩气流的保护下，隔绝空气加热到110～130℃，保温20min。迅速加入5～14mL 1-十八烯，然后慢慢加热到150℃，慢慢滴加10mL溶解NH₄F和NaOH的甲醇溶液到上述体系中，其中NH₄F为6mmol,NaOH为3mmol，滴加完毕50℃继续搅拌40min，慢慢升温至100℃，抽真空，在Ar气保护下迅速升温至300℃，反应60～80min。反应完毕后，冷却至室温，反应产物在5000rpm下离心6min，沉淀用乙醇反复洗涤2-3次，最后将所得产品溶于5mL环己烷中保存待用；

S2：NaYF₄:Yb,Tm/NaYF₄的制备