[发明专利]酵母浸出物中内毒素含量的检测方法

权利要求书

1. 一种酵母浸出物中内毒素含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）干热程序有效性试验

分别配制未干热内毒素系列溶液及经干热处理后的内毒素系列溶液，采用鲎试剂进行测试，计算内毒素衰减并确定具体有效的干热处理条件，在后续试验中按照前面确定的干热处理条件除去外源性内毒素；

2）灵敏度复核试验

配制待复核的鲎试剂及不同浓度的内毒素工作标准品系列溶液，然后将鲎试剂与内毒素工作标准品系列溶液分别进行混合，同时采用检查用水做阴性对照，计算鲎试剂灵敏度的测定值λ_c，当其结果在0.5λ~2.0λ之间，则灵敏度合格；如果不合格，需更换鲎试剂进行复核试验直至合格；

3）干扰试验

分别设置酵母浸出物供试品系列溶液、内毒素标准工作品与酵母浸出物供试品混合系列溶液、内毒素标准工作品系列溶液及检查用水阴性对照溶液，然后利用经灵敏度复核合格的鲎试剂进行测试，确保供试品在何浓度下不干扰试验；

4）凝胶半定量试验

分别设置酵母浸出物供试品系列溶液，内毒素标准工作品与酵母浸出物供试品混合溶液、内毒素标准工作品系列溶液及检查用水阴性对照溶液，再利用经灵敏度复核合格的鲎试剂进行测试，最后计算处供试品溶液的内毒素浓度；其中酵母浸出物供试品通过步骤3）中的干扰试验。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1）中干热处理条件：烘烤温度为220~280℃，保温时间为70~110min。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：干热程序有效性试验中，所用的内毒素为内毒素指示剂，未干热内毒素系列溶液稀释的倍速在1000-50000之间；经干热处理的内毒素系列溶液的稀释倍数在1-20倍之间。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：未干热内毒素系列溶液稀释的倍速分别为2500、5000、10000、20000和40000；经干热处理的内毒素系列溶液的稀释倍数分别为1、2、4、6、8。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2）中，鲎试剂灵敏度标示值λ为0.015~0.500EU/mL；内毒素标准工作品稀释后的浓度在0.1~2.0EU/mL。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤3）中鲎试剂灵敏度标示值λ为0.030~1.000EU/mL，内毒素标准工作品稀释后的浓度为0.1~2.0EU/mL；酵母浸出物稀释后的浓度为0.01~0.500mg/mL。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤4）中鲎试剂灵敏度标示值λ为0.015~0.500EU/mL；内毒素标准工作品稀释后的浓度为0.1~2.0EU/mL。

8.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：鲎试剂灵敏度标示值λ为0.125EU/mL；内毒素标准工作品稀释后的浓度分别为0.250、0.500、1.000、2.000EU/mL。

9.根据权利要求1-8任意一项所述方法在酵母浸出物内毒素含量检测中的应用。

10.根据权利要求1-8任意一项所述方法在含有酵母浸出物的各种微生物、动物细胞的培养基中内毒素含量检测的应用。