[发明专利]酵母浸出物中内毒素含量的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种酵母浸出物中内毒素含量的检测方法。

背景技术

酵母浸出物是以蛋白质含量丰富的食用酵母为原料，采用生物技术，将酵母细胞内的蛋白质、核酸等进行降解后精制而成的天然调味料，它含有20种氨基酸和多肽，此外还含有核苷酸、维生素、有机酸和矿物质等多种有效成分。酵母浸出物中氨基酸平衡良好，味道鲜美浓郁，具有肉香味，因而酵母抽提物是兼具有营养、调味和保健三大功能的优良食品调味料，广泛应用于生物实验室、制药业、发酵行业、医用保健以及动物营养等方面。由于酵母浸出物可为细胞的生长提供氨基酸和维生素等营养成分、可促进细胞生长。近年来，国内外已开始将它作为动物细胞培养基的添加成分进行了应用研究。

目前，我国已有成熟酵母细胞破壁获取酵母浸出物技术，拥有前期研发出了培养基酵母浸出物，已在国内细菌培养、发酵行业开始应用，为进行动物细胞培养基的研究积累了经验和技术，该公司研发出培养基级酵母浸出物，可以作为无血清培养基的添加因子，且非动物源的成分，完全可作为无血清培养基的组成配方。作为无血清培养基除了保证培养基中成分满足细胞生成和发育的需要外，重要的一个要求是培养基的中内毒素含量必须严格控制在规定的范围内。为此，酵母浸出物要想成功取代血清作为无血清培养基的重要组成成分，必须对其内毒素含量有一个明确的标示，以便在配制培养基选择应用，然而当前未见有酵母浸出物内毒素检测方法研究。

发明内容

本发明的目的提供一种酵母浸出物中内毒素含量的检测方法，能够快速准确的检查出酵母浸出物中内毒素的含量，为其应用提供指导。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种酵母浸出物中内毒素含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)干热程序有效性试验

分别配制未干热内毒素系列溶液及经干热处理后的内毒素系列溶液，采用鲎试剂进行测试，计算内毒素衰减并确定具体有效的干热处理条件。

2)灵敏度复核试验

配制待复核的鲎试剂及不同浓度的内毒素工作标准品系列溶液，然后将鲎试剂与内毒素工作标准品系列溶液分别进行混合，同时采用检查用水做阴性对照，计算鲎试剂灵敏度的测定值λ_c，当其结果在0.5λ～2.0λ之间，则灵敏度合格；如果不合格，需更换鲎试剂进行复核试验直至合格。另外，购买的不同生产批次的鲎试剂也必须进行复核实验。

3)干扰试验

分别设置酵母浸出物供试品系列溶液、内毒素标准工作品与酵母浸出物供试品混合系列溶液、内毒素标准工作品系列溶液及检查用水阴性对照溶液，然后利用经灵敏度复核合格的鲎试剂进行测试，确保供试品在何浓度下不干扰试验；

4)凝胶半定量试验

分别设置酵母浸出物供试品系列溶液，内毒素标准工作品与酵母浸出物供试品混合溶液、内毒素标准工作品系列溶液及检查用水阴性对照溶液，再利用经灵敏度复核合格的鲎试剂进行测试，最后计算处供试品溶液的内毒素浓度；其中酵母浸出物供试品通过步骤3)中的干扰试验。

进一步地，步骤1)中干热处理条件：烘烤温度为220～280℃，保温时间为70～110min。

另外，在干热程序有效性试验中，所用的内毒素为内毒素指示剂，未干热内毒素系列溶液稀释的倍速在1000-50000之间；经干热处理的内毒素系列溶液的稀释倍数在1-20倍之间。优选地方案中，未干热内毒素系列溶液稀释的倍速分别为2500、5000、10000、20000和40000；经干热处理的内毒素系列溶液的稀释倍数分别为1、2、4、6、8。

优选地，步骤2)中，鲎试剂灵敏度标示值λ为0.015～0.500EU/mL；进一步优选为0.125EU/mL；内毒素标准工作品稀释后的浓度在0.1～2.0EU/mL，进一步地优选稀释浓度分别为：0.125、0.250、0.500、1.000EU/mL。

优选地，步骤3)中鲎试剂灵敏度标示值λ为0.030～1.000EU/mL，进一步优选为0.500EU/mL；内毒素标准工作品稀释后的浓度为0.1～2.0EU/mL，进一步地优选稀释浓度分别为：0.250、0.500、1.000、2.000EU/mL；酵母浸出物稀释后的浓度为0.01～0.500mg/mL，进一步优选为0.025mg/mL。