[发明专利]一种荧光分析方法和装置

说明书

本发明涉及一种荧光分析方法和装置，具体地，涉及一种无样品垫(优选地可进一步无结合垫)、基于荧光猝灭免疫层析原理的测试片及检测方法。本发明对原有层析试纸条结构进行简化，去除样品垫，却意外地发现变异系数显著减小。本发明方法仅通过测量所述测试区的荧光强度的变化来测定待测物的数量，专属性强；能够检测极低浓度待测物的数量，可同时对待测物质进行定性与定量分析。本发明方法灵敏度更高、定量更准确、变异系数更低、稳定性高、操作简便快捷、成本低廉、适合于现场快速定性定量检测。

技术领域

本发明属于体外检测技术领域，具体地涉及一种基于测量荧光强度的分析方法和装置。

背景技术

在免疫检测领域中，常常需要对各类抗原或抗体进行定性或定量检测。现有技术中，以“和双抗夹心”为基础衍生出多种免疫反应分析方法，如：放射免疫法、酶联免疫法、化学发光法、时间分辨荧光法和荧光免疫法等，可用于确定病原微生物，对人体的特异性蛋白定量检测，从而对疾病进行辅助诊断或监测等等，用途非常广泛。这类免疫反应分析方法，通常将捕获抗体固定于固相载体，然后与抗原(目标蛋白)反应，洗涤后再与标记抗体反应，洗涤，最后检测放射性强度、溶液吸光度或光信号等，从而报告检测样本中目标蛋白的浓度。上述方法的自动化免去了人工洗涤的烦琐，但正因为自动化，使得仪器体积庞大价格昂贵，一般只在大型实验室使用。

1990年，Beggs等综合胶体金和免疫分析技术，建立了胶体金免疫层析法(GICA)，用于检测人尿和血清中的HCG(BEGGS M，NOVOTNY M，SAMPEDRO S.A selfperformingchromatographic immunoassay for the qualitative determination of humanchorionicgonadotrophin(HCG)in urine and serum[J].Clin Chem，1990，36：1084-1085)。此后20年，人们在GICA的基础上，开发出了用于病原体(CN 03115143.4)、激素(CN200610014168.3)、心脏标志物(CN 200410011165.5)、肿瘤标志物(CN 200510104796.6)、自身免疫病标志物(CN 200410027291.X)等的检测试剂；同时也应用到食品、环境(CN03116692.X)和兽医(CN 02139704.X)领域。由于该方法只需肉眼观察即可，非专业人士也可操作，使急诊、基层医院、病人床边和现场等远离大型实验室的地方开展相关检测成为可能，所以应用范围相当广泛。

虽然这种免疫分析技术已经超过20年的发展，但其基本的工作原理并未改变，这决定了到目前为止，它只用于定性或半定量检测(根据检测线灰度深浅定量)，且灵敏度也不如前述的定量免疫分析方法，其进一步的应用遇到了瓶颈。

传统的层析试纸条主要由4部分组成：样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。其中样品垫用来承载样品溶液；硝酸纤维素膜(NC膜)用于承载捕获抗体且为免疫反应发生的重要区域；结合垫用于承载标记抗体；吸水垫用于提供层析的动力，使溶液通过层析作用向上流动。以上4部分在免疫层析试纸条反应的过程中都有可能因为材质、处理方法、承载量的不同等因素增加了测量结果的变异系数(CV)。一般样品垫要事先经过酪蛋白等处理后使用，此过程中会造成不同膜条样品垫之间的差异；结合垫则是由于承载的标记抗体量的不均匀等，导致膜条在测试时变异系数(CV)增大；这些皆能导致CV的大幅上升。

在传统层析试纸条结构基础上，将结合剂固定于微孔中冻干或真空抽干，密闭保存，测试前样本溶液先复溶微孔中干化的结合剂，同时发生反应，再滴加于样品垫，沿NC膜层析涌动。该结构在一定程度上改善了CV，但在医学检验中，单纯改变结合垫的结构已经不能满足日益严格的临床要求。

因此，本领域急需对现有的免疫层析方法进行变革，开发一种灵敏度更高、定量更准确、变异系数更低、操作简便快捷、成本低廉的层析试纸条及检测方法，从而进一步扩展其应用领域。

发明内容