[发明专利]一种黑骨藤的检测方法

权利要求书

1.一种黑骨藤的检测方法，其特征在于：所述黑骨藤这样提取：取黑骨藤药材粉末，按料液比1:20～1:30加入60％～80％乙醇溶液，加热回流提取2～4次，每次50～70min，合并提取液，提取液于70℃水浴蒸干，按料液比1:12.5加蒸馏水使成混悬液，分别依次用与混悬液等量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，各萃取3次，每次静置1小时，将3次正丁醇萃取液合并，浓缩至干，即得；所述检测方法包括含量测定方法，所述含量测定方法包括对绿原酸和杠柳毒苷的含量检测；所述绿原酸和杠柳毒苷的含量检测方法为：

照中国药典附录高效液相色谱法试验：

色谱条件与系统适用性试验：Xtimate C₁₈4.6mm×250mm,5μm；流动相：乙腈(A)-0.05％～0.15％磷酸水溶液(B)，梯度洗脱；检测波长：200～240nm；柱温：24～26℃；流速：0.8～1.2mL·min^-1；

梯度洗脱时，洗脱程序为：0～12min，9％→10％(A)，12～30min，10％→21％(A)，30～50min，21％→35％(A)，50～60min，35％→70％(A)；

混合对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品5.00～5.20mg，置于5mL容量瓶中，以流动相溶解、定容，配制成质量浓度为1.000～1.020mg·mL^-1的单一成分的绿原酸对照品溶液；精密称取杠柳毒苷对照品8.30～8.50mg，置于10mL容量瓶中，以流动相溶解、定容，配制成质量浓度为0.83～0.85mg·mL^-1的单一成分的杠柳毒苷对照品溶液；再精密量取上述绿原酸对照品溶液1.5～2.5mL、杠柳毒苷对照品溶液0.5～1.5mL，置于50mL容量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀，配制成质量浓度分别为0.0406～0.0415mg·mL^-1和0.0165～0.0170mg·mL^-1的绿原酸和杠柳毒苷的混合对照品溶液；

供试品溶液的制备：精密称取黑骨藤药材粉末1.5～2.5g，按料液比1:20～1:30加入65％～75％乙醇溶液45～55mL，加热回流提取2～4次，每次50～70min，合并提取液，提取液于70℃水浴蒸干，加20～30mL蒸馏水使成混悬液，分别依次用等量石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取2～4次，取正丁醇萃取部位，浓缩至干，残渣用适量甲醇溶解，转移并定容置于10mL容量瓶中，摇匀，0.40～0.50μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液；

测定法：分别吸取混合对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.如权利要求1所述的黑骨藤的检测方法，其特征在于：所述黑骨藤这样提取：取黑骨藤药材粉末，按料液比1:25加入70％乙醇溶液，加热回流提取3次，每次1h，合并提取液，提取液于70℃水浴蒸干，按料液比1:12.5加蒸馏水使成混悬液，分别依次用与混悬液等量的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，各萃取3次，每次静置1h，将3次正丁醇萃取液合并，浓缩至干，即得。

3.如权利要求1所述的黑骨藤的检测方法，其特征在于：所述流动相为乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液(B)。

4.如权利要求1所述的黑骨藤的检测方法，其特征在于：所述检测波长为220nm；柱温为25℃；流速为1.0mL·min^-1。

5.如权利要求1所述的黑骨藤的检测方法，其特征在于：所述混合对照品溶液这样制备：精密称取绿原酸对照品5.08mg，置于5mL容量瓶中，以流动相溶解、定容，配制成质量浓度为1.016mg·mL^-1的单一成分的绿原酸对照品溶液；精密称取杠柳毒苷对照品8.40mg，置于10mL容量瓶中，以流动相溶解、定容，配制成质量浓度为0.84mg·mL^-1的单一成分的杠柳毒苷对照品溶液；再精密量取上述绿原酸对照品溶液2mL、杠柳毒苷对照品溶液1mL，置于50mL容量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀，配制成质量浓度分别为0.0406mg·mL^-1和0.0168mg·mL^-1的绿原酸和杠柳毒苷的混合对照品溶液，即得。

6.如权利要求1所述的黑骨藤的检测方法，其特征在于：所述供试品溶液这样制备：精密称取黑骨藤药材粉末2.0g，按料液比1:25加入70％乙醇溶液50mL，加热回流提取3次，每次60min，合并提取液，提取液于70℃水浴蒸干，加25mL蒸馏水使成混悬液，分别依次用等量石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，取正丁醇萃取部位，浓缩至干，残渣用适量甲醇溶解，转移并定容置于10mL容量瓶中，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。