[发明专利]一种核酸测定方法

权利要求书

1.一种核酸测定方法，其特征在于：

所述方法通过可封闭的反应容器实施，所述反应容器包括按序排列的大于两个的管状腔室以及连通所述管状腔室的至少一个通道；所述通道内设置有一种或多种介质；

其中，第一个管状腔室内设置有样品和第一反应试剂，第n个管状腔室内设置有第n反应试剂，其中n等于或大于2且n等于或小于管状腔室的数目；

所述方法包括：将所述反应容器封闭，在所述第一个管状腔室中进行第一组PCR反应，所述第一个管状腔室中的产物通过所述通道传送到后一个管状腔室；任意的前一个管状腔室中反应得到的产物在所述通道中通过液体对流或分子扩散的方式传送至后一个管状腔室；所述第n个管状腔室接收到前一个管状腔室的产物后，在所述第n个管状腔室中进行第n组PCR反应；对所述第n个管状腔室内的产物进行检测，获得所述第n个管状腔室中信号与时间的比值，所述信号与时间的比值是指当信号达到在非饱和即线性增长期的一理想值时信号与所用的时间的比例；根据所述信号与时间的比值和所述管状腔室的位置之间的线性关系来实现核酸的定性或定量测定。

2.根据权利要求1所述的一种核酸测定方法，其特征在于：

所述第一反应试剂包含巢式PCR的第一对引物或RT－PCR的逆转录反应引物或多重PCR的第一组引物；所述第n反应试剂包含巢式PCR或RT－PCR或多重PCR的第n对引物和亲和性物质；所述方法不使用分子探针。

3.根据权利要求1或2所述的一种核酸测定方法，其特征在于：

所述方法还包括对所述管状腔室进行温度控制，所述温度控制包括保持所述管状腔室内恒定的温度梯度或周期性地改变所述管状腔室的整体温度。

4.根据权利要求3所述的一种核酸测定方法，其特征在于：

所述温度控制包括对多个所述管状腔室进行同步温度控制。

5.根据权利要求1或2所述的一种核酸测定方法，其特征在于：

所述管状腔室是柱形或锥形，其内直经在0.1毫米至10毫米之间，管壁厚度在0.05至5毫米之间；所述管状腔室的深度与内直径的比例大于或等于2。

6.根据权利要求1或2所述的一种核酸测定方法，其特征在于：

所述反应容器还包括位于相邻的所述管状腔室之间且向所述通道内凸起的弧形连接部。

7.根据权利要求2所述的一种核酸测定方法，其特征在于：

所述亲和性物质包括染料。

8.根据权利要求2所述的一种核酸测定方法，其特征在于：

可检测信号包括光学信号或电学信号；所述光学信号包括荧光信号、光吸收信号、拉曼散射信号或化学发光信号。