[发明专利]一株马乳酒样乳杆菌ZW3菌株及其分子检测方法

权利要求书

1.一种快速鉴定马乳酒样乳杆菌(Lactobacillus kefiranofaciens subsp.kefiranofaciens)ZW3的分子检测方法，ZW3菌株的保藏编号CGMCC No.2809，保藏日2008年12月18日，其特征是：在结合镜检观察形态学特征和16S rDNA的基础上运用MLST方法，设计特异性引物序列进行PCR，用于识别马乳酒样乳杆菌ZW3；包括以下步骤：

(1)形态学观察待测菌株；

(2)提取待测菌株的基因组DNA；

(3)对待测菌株进行16S rDNA比对；

(4)选取管家基因rpoA、Hsp60、LeuS、rpsB、glyK、pyrG和fusA作为目的基因，设计并合成7组特异性引物；检测方法中用到的管家基因的排列顺序为rpoA-Hsp60-LeuS-rpsB-glyK-pyrG-fusA；

(5)以步骤(2)中提取得到的基因组DNA为模版，用步骤(4)中设计好的特异性引物进行PCR扩增得到片段产物；

(6)将扩增产物用0.8％的琼脂糖凝胶电泳进行分析；

(7)将扩增成功的PCR产物进行2次平行实验，并进行核酸测序，测序引物与PCR引物相同；

(8)结合镜检和16S rDNA比对结果的基础，将所获得的测序结果与马乳酒样乳杆菌ZW3各基因的标准序列进行比对；通过比对结果对单个基因的SNP位点进行统计，根据SNP位点确定该菌株的序列型即ST型；由ST型判断所测菌株是否为马乳酒样乳杆菌ZW3。

2.根据权利要求1所述的分子检测方法，其特征是：16S rDNA所用引物对如SEQ IDNO.1-SEQ ID NO.2所示。

3.根据权利要求1所述的分子检测方法，其特征是：步骤(4)中设计的7组特异性引物中，每组特异性引物分别包括正向引物和反向引物，引物序列见序列表中SEQ ID NO.3-SEQID NO.16。

4.根据权利要求1所述的分子检测方法，其特征是：马乳酒样乳杆菌ZW3的ST型为ST-1，序列号如SEQ ID NO.17所示。

5.权利要求1所述的快速鉴定马乳酒样乳杆菌ZW3的分子检测方法的应用，其特征是：所述的分子检测方法用于含有马乳酒样乳杆菌ZW3的发酵食品、药物以及保健品中菌株的检测。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征是：所述的发酵食品为发酵乳、发酵果蔬、发酵植物蛋白或发酵肉制品。