[发明专利]环瓜氨酸肽抗体和类风湿因子检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及医学免疫学中荧光免疫层析技术领域，具体地说是一种能够快速准确的对环瓜氨酸肽抗体和类风湿因子进行定量分析的环瓜氨酸肽抗体和类风湿因子检测试剂盒及其制备方法。

背景技术：

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一个累及周围关节为主的多系统性炎症性的自身免疫病，具体病因尚不清楚，可能与感染因子和遗传倾向两种因素有关，RA是以关节炎症的多变性、关节破坏、进行性功能障碍为特点的风湿性疾病，我国患病率约为 0.3％-0.6％，是造成我国人群丧失劳动力和致残的主要病因之一。该病早期常因症状不典型被误诊或不能及时确诊，而延迟的治疗使该病的预后很差，如果能够早期确诊本病，并及时给予合理治疗，则会明显改善预后。RA的临床诊断类风湿因子(rheumatoid factor,RF)是常用的经典血清学指标，但是缺乏特异性，除了患者以外，还可见于结缔组织病、肝炎、肿瘤、感染性疾病等其他的疾病以及正常健康人。尽管RF对RA是非特异的，但是高滴度的RF与RA疾病密切相关。特别是RF滴度越高，提示患者的预后越差，是损伤指标中最强有力的预后因子，其他自身抗体不能取代在诊断和预后判断中的地位。所以，由于RF在RA疾病中具有出现早、灵敏度高等优点，现在仍是临床早期诊断的主要依据之一。近年来又发现APF、AFA的共同抗原决定族为环瓜氨酸肽(cyclic citrullonated peptide,CCP),抗CCP 抗体能够在类风湿性关节炎早期出现，与RA患者的关节侵蚀状况和预后存在密切的相关性，抗CCP抗体对类风湿性关节炎的敏感性虽低于类风湿因子，但诊断的特异性接近95％，显著高于类风湿因子等其他临床诊断常用的指标，通过ELISA法检测RA患者的抗CCP抗体，并证明抗CCP抗体对RA诊断有很高的特异性及敏感性，国内目前抗CCP抗体正逐渐应用于对RA的临床珍断。抗CCP抗体是较好的RA早期诊断标志物，也是鉴别非侵蚀性、侵蚀性RA的灵敏指标。

RF和抗CCP抗体两项指标联合用来诊断RA时，敏感性能得到明显的提高，与其他各单项相比，大大降低了漏诊率；同时阴性预测值也提高，如果RF和抗CCP抗体两项指标全为阴性，几乎可以排除患有RA的可能，具有相当高的临床应用价值。

免疫分析技术是利用微量抗原与相应的高特异性抗体之间的免疫反应，来检测如激素、药物、蛋白质、多肽、酶、肿瘤相关抗原、微生素、病毒、细菌及金属元素等生物体内活性物质。免疫分析技术包括标记免疫分析、非标记免疫分析和仪器免疫分析。本试剂盒利用的含有稀土元素的羧基乳胶微球标记免疫分析技术是属于标记免疫分析之一种。

荧光免疫分析(FIA)和放射免疫分析(RIA)自问世以来，经历了几十年的发展，但是人们越来越感觉到FIA因自然本地太高，干扰检测结果；RIA采用同位素标记，对人体有极大危害并给实验带来不便。酶免疫分析(EIA)也因酶本身不稳定，受其他影响因素较大，推广应用受到限制。80年代初，人们开始研究用稀土元素代替荧光物质和同位素标记蛋白质或抗体，将时间分辨技术引入到生物检测领域，建立了新型的超微量时间分辨荧光免疫分析技术(Time resolved Fluoroimmunoassay，简称TrFIA)。该技术采用多学科先进技术，集结了其他免疫分析的特点，在免疫学、分子生物学、细胞学和医学等领域，取得长足的发展和广泛应用。

TrFIA利用了具有独特荧光特性的3价稀土离子及螯合物为示踪物代替荧光物质、酶、同位素、化学发光物质，标记抗体、抗原、激素、多肽、蛋白质、核酸探针及生物细胞，待反应体系(如抗原抗体反应、核酸探针杂交、生物素亲和素反应以及靶细胞对效应细胞的杀伤效应等)发生后，用TrFIA检测仪测定反应产物中的荧光强度。根据产物荧光强度和相对荧光强度的比值，判断反应体系中分析物的浓度，从而达到定量分析。在通常的荧光测定中，由于测试样品中含有多种荧光成分，背景荧光(来自样品中的胶体颗粒和溶剂分子引起的散射光以及血清中蛋白质和其他化合物发出的非特异性荧光)强度大、干扰强，成为荧光分析法大范围推广的瓶颈。TrFIA之所以能够成为继EIA、RIA之后一种新的灵敏的检测方法，主要取决于镧系元素独特的荧光特点、检测中采用的波长分辨和时间延迟技术以及解离 -增强技术。