[发明专利]一种细胞分裂素通过核苷转运体引起人白血病细胞凋亡的应用

说明书

技术领域

本发明涉及细胞分裂素ortho-Topolin Riboside(oTR)对人白血病细胞株的抗 肿瘤作用，转运体拮抗剂能逆转细胞分裂素oTR的抗肿瘤作用，属于生物化学 与分子生物学技术领域。

背景技术

白血病是一类骨髓恶性克隆性疾病，又称“血癌”，包括慢性粒细胞白血 病(Chronic myeloid leukemia),慢性淋巴细胞白血病(Chronic lymphocytic leukemia)，急性淋巴细胞白血病(Acute lymphoblastic leukemia)和急性髓细胞 白血病(Acute myeloid leukemia)，目前尚不可治愈。患者的预后很大程度上取 决于所患白血病的类型及年龄。其中，急性髓细胞白血病是成年人发病率最高 的一类急性白血病，以发病快，病程发展迅速为特点。患者的完全缓解率和长 期无病生存率均较低。

目前，临床上常采用以阿糖胞苷(Ara-C)为基本化疗药物，其他药物如地 西他滨、普鲁卡因胺、阿扎胞苷等为辅联合用药的方法来治疗白血病。但是， 阿糖胞苷具有骨髓抑制，神经毒性等副作用。因此，寻找有效提高治疗效率， 毒副作用小的天然药物来治疗白血病是十分必要的。

细胞分裂素(cytokinin)是植物生长发育中一类重要的植物激素，因为被发 现促进烟草组织培养中的细胞分裂而得名。从结构上来说，细胞分裂素是由腺 嘌呤N6位置上的H被其它基团取代形成，因侧链R基的长度、不饱和度和其 它性质不同有很大差异。根据取代基的不同，细胞分裂素可以分为三类：异戊 二烯类，如异戊烯基腺嘌呤(N_6-isopentenyladenosine，iPR)；糠醛衍生物，如 激动素核苷(kinetin riboside，KR)；芳香族细胞分裂素，如N₆-2-苄胺羟基-9- 呋喃核糖基嘌呤(ortho-Topolin Riboside，oTR)等。

以往关于细胞分裂素的报道主要集中在调节植物生长发育的作用上，近几 年细胞分裂素对动物细胞的作用逐渐引起了研究者的关注。N₆-2-苄胺羟基-9-呋 喃核糖基嘌呤(ortho-Topolin Riboside，oTR)是一种存在于黎明时杨树叶子内 合成的天然核苷类芳香族细胞分裂素。2010年根据美国国立癌症研究中心(NIC) 测试结果发现，oTR对人的9大瘤系60种肿瘤细胞系(NIC₆₀)具有非常显著的 体外增殖抑制活性，其中对白血病细胞株的药物敏感性最强(IC₅₀≦1.7μM)。 并且通过药物体内筛选模型-中空纤维法发现oTR在体内对一些肿瘤模型小鼠无 明显的急性毒性反应，在目前已知核苷类细胞分裂素中具有较强的抗肿瘤活性， 对不同组织来源的肿瘤细胞有不同程度的抑制增殖和毒性作用。上述结果充分 表明oTR作为一种核苷类细胞分裂素具有很强的抗肿瘤临床应用潜力和临床药 用研发价值。

细胞分裂素oTR跨膜转运进入细胞的机制目前仍未见报道。作为一种核苷 类似物，oTR要穿过磷脂双分子层的细胞膜，就需要一种贯穿在细胞膜上的通 道，即腺苷转运体(adenosine transporter，AT)；另一方面，oTR是一种嘌呤衍 生物，而腺苷受体(adenosine receptor，AR)有可能也参与oTR进入细胞的过 程。因此，研究oTR进入细胞的通道，为研究oTR的抗肿瘤作用应用潜力提供 了理论依据。

发明内容

本发明针对上述存在的问题，提供了一种细胞分裂素通过转运体引起人白 血病细胞株凋亡的应用。

本发明的技术方案：

一种细胞分裂素通过核苷转运体引起人白血病细胞凋亡的应用，步骤如下：

(1)细胞培养：从液氮中取出人白血病THP-1细胞冻存管，放入37℃水 浴锅中迅速融化，将细胞吸出放入离心管中，1000rpm/min离心5min，倒掉上 清，将人白血病细胞株THP-1悬浮于含有灭活胎牛血清的无菌DMEM培养液中， 置于浓度为5％CO₂、相对湿度为90％、温度为37℃的培养箱中培养，细胞长至 培养瓶底面积的70％～80％传代1次；