[发明专利]一种同时检测多种肿瘤标志物的3D折叠纸基微流体荧光检测装置

说明书

本发明涉及一种同时检测多种肿瘤标志物的3D折叠纸基微流体荧光检测装置，属于生物检测技术领域。该检测装置可用于同时对多种肿瘤标志物的检测。本发明包括以下步骤：(1)纸基微流体芯片的制作；(2)纸基微流体芯片的预处理；(3)三维纸基同时检测的免疫反应程序；(4)荧光分析检测。本发明将纸基微流体分析平台与荧光检测结合起来，用于多种肿瘤标志物的同时检测。这种检测装置简单，便宜，便携，一次性，易于使用，为发展中国家和资源有限和偏远地区提供了有利的平台。

技术领域

本发明涉及一种检测装置，尤其是一种能对多种肿瘤标志物进行同时检测的3D折叠纸基微流体荧光检测装置，属于生物检测技术领域。

背景技术

根据世界卫生组织和国际癌症研究机构(IARC)发布的“世界癌症报告”，癌症是全球死亡的主要原因，早期检测多种肿瘤标志物便于诊断癌症和治疗监测，并显着提高了治疗效率和存活率。然而，仅检测单个肿瘤标志物通常不足以准确诊断癌症，因为大多数标志物不对特定肿瘤具有特异性。为了提高癌症诊断的准确性，有必要结合多种肿瘤标志物的检测，因为它可以显着提高诊断特异性。

已经提出了多种方法来在过去几年中同时检测多种肿瘤标志物。例如，电化学免疫测定，无标记方法，介导电泳测定，化学发光分析，生物标记的扫描测定，光子悬浮阵列。但是所有这些技术都不适合进行点对点测试，因为它们需要大型和复杂的仪器，复杂的操作，长时间的分析时间和高技能的人员进行操作。有限的设备和没有足够培训的人员可能会限制偏远和农村地区早期筛查肿瘤。因此，在不使用实验室或经过培训的人员的情况下，可以同时检测多个肿瘤标志物的易于快速和低成本的分析方法的需求是迫切需要的。近年来，免疫标记与纸基微流体结合的试纸越来越受到重视，因为它具有操作简便，分析物体积小，分析时间短，成本低，多分析分析的优点，不需要专业以及实现护理点测试的能力。然而，这些方法多是酶联免疫，酶联免疫反应中需要加底物与终止液，使反应程序更复杂；而且酶联需要适宜的温度与PH以免影响酶的活性，不适合快速随时随地检测。而荧光材料是很好的选择，因为光信号是敏感的，并且具有荧光标记的免疫分析具有量化多分析物的潜力。异硫氰酸荧光素(FITC)是一种发强黄绿色荧光的染料，它量子产率高、荧光寿命长，用FITC来标记抗体进行荧光免疫分析来检测肿瘤标志物是一种便捷有效、准确性高的检测方法。

发明内容

本发明解决的技术问题是：提出一种同时检测多种肿瘤标志物的3D折叠纸基微流体荧光检测装置，低成本便携式的纸基荧光检测装置，并应用到对多种肿瘤标志物的同时检测中。

为了解决上述技术问题，本发明提出的技术方案是：一种同时检测多种肿瘤标志物的3D折叠纸基微流体荧光检测装置，包括以下步骤：

(1)纸基微流体芯片的制作；

在计算机上设计出3D纸基的图形，构成可折叠的三维亲水和疏水区域，用于同时检测多种肿瘤标志物，在纸基2、3两层增加检测区域孔的数目为1-5，即可增加同时检测的标志物种类数为1-5，并用喷蜡打印机打印，放进烘箱烘烤一段时间，取出冷却至室温，将纸基沿着打印区域剪下，并进行三维折叠；

(2)纸基微流体芯片的预处理；

将烘烤好的纸基芯片的第3层用等离子清洗机进行氧气等离子体处理，使纸表面的碳自由基形成氧自由基，导致醛基的产生，此目的是便于抗体在纸上的固定；

(3)三维纸基同时检测的免疫反应程序；

首先在等离子体处理过的第3层分别固定1-5种肿瘤标志物的包被抗体，然后用阻隔液阻隔纸上的结合位点，在第2层加入对应的1-5种肿瘤标志物的异硫氰酸荧光素标记抗体，将1、2两层对叠，在1层样品区加入待测抗原混合液，最后将三层全部对叠，进行免疫反应；

(4)荧光分析检测；