[发明专利]一种可长期保存的质控品通用血浆基质制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物学检测技术领域。更具体地，本发明涉及一种通用质控品血浆基质的制备方法。

背景技术

心脑血管疾病是现代社会中危害大众健康的重大疾病，居各种死因首位。心脑血管疾病具有发病率高、致残率高、死亡率高、复发率高、并发症多的特点。据统计中国心脑血管疾病患者已经超过2.7亿人，每年死于心脑血管疾病近300万人，占全国每年总死亡病因的30％以上。因此，预防心脑血管的发病，显得尤为关键。

心脑血管疾病的核心病理症状是血栓的形成，凝血-止血功能是机体重要的自我保护机制。凝血功能检查主要包括血浆凝血酶原时间(PT)，纤维蛋白原(FIB)，活化部分凝血活酶时间(APTT)和血浆凝血酶时间(TT)，凝血功能检查可以反应内、外源凝血途径是否异常，是否有纤溶亢进及血栓形成，是手术前凝血机制筛查、血栓形成性疾病早期诊断、溶栓治疗监测的必选监测项目。为了防止血栓的形成，患者需要使用抗凝类药物，这些主要包括普通未分级肝素、低分子量肝素、磺达肝素、利伐沙班、依度沙班和阿哌沙班等，有人对抗血栓药物反应微弱，凝血倾向仍然很强，有人则对药物反应过于显著，会发生出血，也有严重的有生命危险。所以，对抗血栓药物的监测非常重要。抗凝血酶测定通常用于检测患者体内抗凝血酶的活性，以辅助临床医生判定患者抗凝机能是否正常以及辅助临床医生确定合适的抗凝药物用量。

如上所述的PT、APTT、FIB、抗凝药物浓度监测、抗凝血酶活性测试临床上进行时，都需要用到对应的质控品，以保证检测检测的可靠性。这几种质控品配制时的基质都是血浆，血浆的化学成分中，水分占90％～92％，溶质以血浆蛋白为主，它是血浆中最主要的固体成分，含量为60～80g/L。为了不使血浆在某些物理和化学因素作用下，其特定的空间构象被改变，从而导致其理化性质的改变和生物活性的丧失，采用真空冷冻干燥方法将血浆冻干保存最为理想。冻干后的血浆能在常温条件下长期保存，占用空间小、质量轻、便于运输，并易重新复水而恢复活性。

血浆的冷冻干燥是指把血浆溶液在低温下冻结，然后在真空条件下升华干燥，除去冰晶，待升华结束后再进行解析干燥，除去部分结合水的干燥方法。在整个冷冻干燥过程中存在各种应力，包括低温应力、冻结应力(包括枝状冰晶的形成、离子强度增加、pH改变、相的分离等)及干燥应力(移去蛋白质表面单层水分子)等，这些应力通常是直接或间接导致蛋白质变性的因素。为了维持血浆的正常功能，在冷冻干燥过程通常需要添加一定量的保护剂。

要获得理想的冻干制品，适宜的冻干保护剂很重要。冻干保护剂一般可分为多羟基化合物、糖、氨基酸、醇、蛋白质、聚合物和无机盐等，不仅要具有保护制品生物学活性的效果，而且要具有冻干赋形作用，但任何单一的保护剂很难具备所有特性，需要根据产品特性筛选出合适的冻干保护剂。

冻干保护剂在冷冻过程中、干燥过程以及冻干品的长期贮存过程中都有很好的保护作用

在产品的冷冻过程中，认可度较大的“优先作用”机理认为，蛋白质溶液在达到最大冻结浓度之前优先与水作用，而保护剂优先被排斥在蛋白质区域处。这是由于保护剂的加入增大了水分子的表面张力促使了蛋白质分子优先与水分子相互作用。在这种情况下蛋白质分子外表面比其体相中有相对较多的水分子和相对较少的保护剂分子，从而也就保护了蛋白质的天然构象。

干燥过程中“玻璃态假说”是一种认可度比较广的保护机理。在含有保护剂溶液的干燥过程中，当浓度足够大且保护剂不发生结晶时，保护剂与活性组分混合物就会形成玻璃态。玻璃态分为两种即强玻璃和弱玻璃。在玻璃化转变温度以下进行降温，弱玻璃粘度的增加比强玻璃来的快。因此，赋形剂形成弱玻璃要比形成强玻璃的保护效果好得多。蔗糖和海藻糖就是因为能够形成一种弱玻璃而具有很好的保护作用。

干燥过程中出现的引起蛋白质变质的时间尺度为小时，而对于储藏而言时间尺度为月或年。在正确的冷冻干燥工艺中，要求产品温度接近于其玻璃化转变温度而在正确的储藏条件下环境温度应当比其玻璃化转变温度低得多以获得很长的松驰时间。