[发明专利]一种针对电子烟气溶胶水提物的细菌回复突变试验

权利要求书

1.一种针对电子烟气溶胶水提物的细菌回复突变试验，具体为以下步骤：

(1)样品前处理：

采用直线型吸烟机，在抽吸容量为55.0ml，抽吸持续时间3s，抽吸频率30s的条件下，连续抽吸100口电子烟，用装有FM细胞培养基的捕集瓶捕集烟雾，捕集浓度为20口/mL，捕集液用0.22μm无菌过滤器过滤除菌，得到电子烟烟雾的气溶胶水提物作为待测液，-80℃保存待用；

(2)受试菌的培养：

将TA98和TA100鼠伤寒沙门氏工程菌分别加入到装有培养基的无菌三角瓶中，置于37℃条件下，静置培养16h或100次/min振荡培养10h；

(3)受试菌浓度的确定：

用紫外分光光度计分别测定培养所得TA98和TA100鼠伤寒沙门氏工程菌在600nm下的OD值，然后用培养基稀释菌液至其OD₆₀₀值为0.5；

(4)S9混合液的配制：

将1.65mol/L的氯化钾溶液和0.4mol/L的氯化镁溶液按照1:1的体积比混合后配制成氯化钾-氯化镁溶液；取磷酸缓冲液、氯化钾-氯化镁溶液、0.05mol/L的葡萄糖-6磷酸钠盐缓冲液和0.025mol/L的辅酶-Ⅱ溶液，按照30:2:5:8的体积比混合，用0.22μm无菌过滤器过滤除菌后，与S9代谢活化液按照9:1的体积比混合，配制成S9混合液备用；

(5)受试物的分组

将受试物分为四组：自发回变组、溶剂对照组、阳性对照组和样品测试组；其中，样品测试组按表1所示的不同剂量将待测液加入培养中；自发回变组、溶剂对照组和阳性对照组则按表2所示的不同剂量将待测液加入培养中；将自发回变组、溶剂对照组、阳性对照组、样品测试组样品分别按表3所示的4个检测体系加样；

表1 Ames细菌回复突变试验样品测试组加样表

表2 Ames细菌回复突变试验自发回变组、溶剂对照组、阳性对照组加样表

表3 Ames细菌回复突变试验4个检测体系加样表

(6)受试物的培养

将各组受试物分别加入到2.0mL，40℃水浴保温的0.6％(W/V)琼脂顶层培养基中，混匀后迅速倒入1.8％(W/V)琼脂底层培养基中，转动平皿使顶层培养基均匀分布在底层上，平放固化，每个剂量设3个复皿，置于37℃、5％CO₂培养箱中培养48h，观察结果；

(7)结果判定

计算培养长出的回变菌落数，在背景生长良好的条件下，样品测试组诱发的回变菌落数等于或大于自发回变组菌落数的2倍以上，并有剂量效应关系，即认为样品测试组试验结果为阳性。