[发明专利]一种茶叶中农药对映异构体残留量的测定方法

说明书

本发明提供一种茶叶中农药对映异构体残留量的测定方法。所述检测方法包括如下步骤：步骤1：提供含有残留甲胺磷和/或其衍生物的茶叶原料的步骤；步骤2：对步骤1中所述茶叶原料中残留的甲胺磷和/或其衍生物进行提取和对甲胺磷和/或其衍生物以外的杂质进行去除；步骤3：将步骤2得到的去除杂质的甲胺磷和/或其衍生物的提取物进行色谱分离，以使得甲胺磷和/或其衍生物的对映体分离；步骤4：将步骤3得到的、分离了的对映体进行质谱检测，从而确定各对映体的含量。本发明的检测方法可以对单一化合物或者同时对多种化合物对映体进行拆分，得到的对映体分离度大于1.5，检测过程耗时较短。

技术领域

本发明涉及一种茶叶中农药对映体残留量的测定方法，尤其是涉及一种茶叶中手性农药(+)-甲胺磷、(-)-甲胺磷、(+)-乙酰基甲胺磷和(-)-乙酰基甲胺磷残留量的测定方法，属于农药残留物的检测领域。

背景技术

手性是指物质本身立体空间结构左右对称呈镜像，如同人的左右手，相似却不能重叠，是自然界本质属性之一。受生产技术、成本及实际使用等条件的约束，目前世界上有近25％的商用农药具有对映异构体，而在中国这一比例估计超过40％。在农药中手性对映异构体常常表现出不同的生物活性，一种对映体具有高靶标活性的同时，另一种可能是低效或无效的。另一方面多数手性农药其中一个对映体比其外消旋体显示出更强的急性毒性，且与其余对映体的急性毒性存在显著差异。如腈菌唑的(+)-对映体的抗菌活性是(-)-对映体的1.79-1.96倍，同时其毒性也更大；多效唑的杀菌活性(2R,3R)-(+)-体高于(2S,3S)-(-)-体，但对植物生长调节活性则恰好相反；不同锐劲特的对映体在网纹水蚤体内所表现出的急性毒性和生殖毒性也不同。目前，为保护环境和人体健康，很多国家和地区立法限定外消旋农药的使用，要求必须要使用具有正向活性的单一异构体，减少低活性异构体的使用。

甲胺磷和乙酰基甲胺磷是高效的有机磷杀虫剂，其分子结构中均包含1个磷原子手性中心，分别有2个对映异构体。根据研究，(+)-甲胺磷具有潜在的神经毒性，而(-)-甲胺磷则无法引起神经损伤。乙酰基甲胺磷、甲胺磷的(+)-体对家蝇的毒性较(-)-体更大。(+)-甲胺磷对大型蚤的毒性是(-)-甲胺磷的7倍，而在体外牛细胞试验中，(-)-甲胺磷对乙酰胆碱酯酶的抑制作用比(+)-甲胺磷强8-12.4倍。由于甲胺磷毒性强烈，2008年我国就停止对其生产使用，而乙酰基甲胺磷虽可使用，但在植物体内会转化成甲胺磷。在我国现行有效的食品中农药残留限量标准中，甲胺磷、乙酰基甲胺磷在茶叶中的最大残留限量均为50μg/kg，但标准仅针对外消旋体含量制定，因此，研究毒性不同的对映体的识别和定量分析技术，有利于更科学的评估其使用过程中的安全性。

超临界流体色谱是以超临界二氧化碳作为流动相的色谱分离技术，相比传统气相、液相色谱，由于使用了低粘度、高溶解性、高密度的超临界流体，其具有分析速度快、系统压降低、分离效率高、绿色环保等多种特点。由于超临界二氧化碳流体可与多种有机试剂混合，从而改变其溶解性，因而可以根据不同固定相与目标化合物的结合能力，添加不同比例的有机溶剂，达到对目标化合物保留-洗脱的目的。超临界流体色谱法作为一种新型的分离方法，在手性化合物拆分上有独特的优势，目前，已在包括有机磷类，拟除虫菊酯类，砜亚胺类，三唑类，苯氧羧酸类等多种手性农药的对映体拆分中得到了应用，但还未见有使用超临界流体色谱对甲胺磷或乙酰基甲胺磷进行对映体拆分的相关报道。

近年来，手性农药的拆分及定量分析技术逐渐发展，伴随手性固定相的不断开发，包括液相色谱，气相色谱，毛细管电泳等多种分离技术被运用在手性化合物拆分工作中，有报道使用手性固定相液相色谱及气相色谱质谱联用法对甲胺磷或乙酰基甲胺磷进行了对映体拆分。

但现有技术中，不论是气相、液相色谱或毛细管电泳等方法，均存在对映异构体分离度不佳、耗时较长、仅能对单一化合物进行拆分以及可能用到大量有毒有机试剂等不足。

发明内容