[发明专利]增强转录水平的高产安丝菌素菌株及其制备方法

权利要求书

1.一种增强转录水平的高产安丝菌素菌株，其特征在于：所述菌株的N位甲基转移酶过量表达。

2.根据权利要求1所述的增强转录水平的高产安丝菌素菌株，其特征在于：菌株由ATCC 31280过量表达后获得。

3.一种增强转录水平的高产安丝菌素菌株的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1），构建用于加倍甲基转移酶基因asm10的整合型质粒载体；

步骤2），将步骤1）构建得到的质粒载体通过接合转移导入受体菌NXJ-22中进行同源重组，并筛选基因过量表达重组的突变株。

4.根据权利要求3所述的安丝菌素高产菌株的制备方法，其特征在于：步骤1）中，质粒载体由质粒pDR3-K*重组获得。

5.根据权利要求3或4所述的安丝菌素高产菌株的制备方法，其特征在于：基因asm10来源于珍贵束丝放线菌ATCC 31565。

6.根据权利要求5所述的高产安丝菌素菌株的制备方法，其特征在于：在起始密码子前插入RBS位点序列ATCTGAGTTGAAGAGGTGACGTC。

7.根据权利要求6所述的高产安丝菌素菌株的制备方法，其特征在于：步骤3)中，通过抗性筛选和PCR验证获得过量表达asm10基因的突变株。

8.根据权利要求7所述的高丝菌素高产菌株的制备方法，其特征在于：质粒载体的构建通过在质粒的SpeI/EcoRI位点插入asm10的PCR片段（SpeI/EcoRI）。

9.根据权利要求3~8所述的安丝菌素高产菌株制备安丝菌素的方法，其特征在于，包括以下步骤：将活化后的asm10基因过量表达突变株的菌丝体在一级种子培养基中，30℃、220 r/min条件下培养24 h；按4%接种量转接至二级种子培养基中，30℃、220 r/min的转速下培养24 h；按10%的接种量转接至发酵培养基中，25℃、220 r/min的转速下发酵7 d后收集发酵液并进行萃取。

10.根据权利要求9所述的安丝菌素高产菌株制备安丝菌素的方法，其特征在于：

一级种子培养基包括TSB 3w/v%，酵母提取物0.5w/v%，蔗糖5w/v%；

或者二级种子培养基包括TSB 3w/v%，酵母提取物0.5w/v%，蔗糖2.5w/v%，异丁醇0.05v/v%，异丙醇0.05v/v%，淀粉1w/v%；

或者发酵培养基包括酵母提取物0.8w/v%，麦芽提取物1w/v%，蔗糖1.5w/v%，异丁醇0.5v/v%，异丙醇1.2v/v%，淀粉2.5w/v%，MgCl₂ 2 mmol/L。