[发明专利]一种检测多种动物源性成分的试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种检测多种动物源成分的试剂盒，包括膜芯片，所述膜芯片由支持膜和固定于支持膜上的探针组成；所述探针为检测猪、羊、牦牛、驴和鼠的特异性探针，其序列如Seq No. 1-5所示，各探针的5’端带有氨基标记。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，支持膜为硝酸纤维素膜、尼龙膜或聚丙烯膜。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括检测内参基因的内参探针、阳性探针和阴性探针的膜芯片，其序列如Seq No. 6-8所示，各探针的5’端带有氨基标记。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括5’端带生物素标记的阳性寡核苷酸单链DNA，其序列如Seq No. 9所示。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括碱性磷酸酶标记链霉亲和素，底物显色液，去活化液，杂交液，酶孵育液；所述去活化液为100 mmol/L NaOH。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括猪、羊、牦牛、驴和小鼠成分的扩增引物对和内参扩增引物对，其序列如Seq No. 10-21所示；所述扩增引物对中反向引物的5'端带有生物素标记。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，还包括辅料，所述辅料包括脱氧核糖核苷三磷酸（dNTP），尿嘧啶DNA糖基酶（UNG酶），DNA聚合酶（Taq酶）和10×PCR缓冲液。

8.一种采用如权利要求1-7任一所述试剂盒检测多种动物源成分的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）提取样品中DNA；

（2）以步骤（1）中DNA为模板进行多重PCR；

（3）将步骤（2）中PCR产物与试剂盒中的膜芯片杂交并显色；

（4）对结果进行判断：

a）空白对照：PC显色，其余靶点无信号检出；

b）阴性对照：PC显色，内参有信号检出；

c）阳性对照：PC显色，内参有信号检出，靶点有信号检出；

同时满足以上三个条件的为有效实验，根据显色结果判断所含动物源性成分。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤（3）中杂交步骤包括去活化，杂交，酶孵育操作。