[发明专利]增强聚酮合酶基因转录水平的高产安丝菌素菌株及其制备方法

权利要求书

1.一种增强聚酮合酶基因转录水平的安丝菌素菌株，其特征在于：基因ansa9起始密码子前插入红霉素抗性基因启动子。

2.根据权利要求1所述增强聚酮合酶基因转录水平的安丝菌素菌株，其特征在于：出发菌株为ATCC 31280。

3.一种增强聚酮合酶基因转录水平的高产安丝菌素菌株的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1），设计并扩增用于同源重组的同源左臂右臂，以及用于加强基因表达的组成型强启动子permE*；

步骤2），设计并构建用于通过同源重组在ansa9起始密码子前插入红霉素抗性基因启动子的质粒；

步骤3），将上述构建得到的质粒通过接合转移导入受体菌珍贵束丝放线菌ATCC 31280中进行同源重组；

步骤4），通过抗性筛选和PCR验证获得过量表达ansa9基因的突变株。

4.根据权利要求3所述的高产安丝菌素菌株的制备方法，其特征在于：所述质粒由pJTU1278的SacI/HindIII位点插入左右同源臂，并利用XbaI/BglII酶切位点插入启动子序列。

5.根据权利要求3或4所述的高产安丝菌素菌株的制备方法，其特征在于：所述启动子为红霉素抗性基因启动子。

6.根据权利要求5所述的高产安丝菌素菌株的制备方法，其特征在于，启动子的序列为：

GCTTGGGCTGCAGGTCGACTCTAGTATGCATGCGAGTGTCCGTTCGAGTGGCGGCTTGCGCCCGATGCTAGTCGCGGTTGATCGGCGATCGCAGGTGCACGCGGTCGATCTTGACGGCTGGCGAGAGGTGCGGGGAGGATCTGACCGACGCGGTCCACACGTGGCACCGCGATGCTGTTGTGGGCACAATCGTGCCGGTTGGTAGGATCCACATATGTTGGGGA。

7.根据权利要求6所述的高产安丝菌素菌株的制备方法，其特征在于，用于通过同源重组插入启动子的同源臂左臂序列为：

GCGGACAGCAGCAGCGGCAGCGCGCCCGCCGGACGCCGCTCCCCCGGCCCGGTCGGCGCGTCGCCCTCCTCCACGACCAGGTGCGCGTTGGTCCCGCTCATGCCGAACGCGGACACCGCCGCGCGCCGGGACCGCTCCCCGCGCGGCCACGGCGCGGGCTCGGTCAGCACCCGCAGCGCGCCGGAGCCCCAGTCGACCTCGGGGGTGAGCCGGTCGGCGTGCAGGGTGCGCGGCGCCACGCCGTGGCGCAGCGCCTGCACGACCTTGACCAGCCCCAGCACCCCGGCCGCGCCCTGGGCGTGCCCGATGTTGGACTTGAGCGAGCCGAGCAGCAGCGGCCTGCCCCCTGGCCTGGCGCGCCCGTAGGTGGCCTGGAGCGCCGCCGCCTCGATCGGGTCGCCGAGGCGGGTGCCGGTGCCGTGCGCCTCCAGCAGGTCCACGTCGGACGGCCGCAGCCCCGCGTCCTCCAGCGCCGCCTCGATGACGCGCTGCTGCGCGGCCCCGTTCGGCGCGGTCAGCCCGTTGGACGCGCCGTCGGAGTTGACCGCGCTGCCCCGGACCACCGCCAGCACCGGCCGCCCGGCGCGGCGCGCGTCCGAGAGCCGCTCCAGCAGCACCACGCCGACGCCCTCGCCCCACGCCGTGCCGTCGGCGTCGGCGGAGAACGCCTTGCAGCGGCCGTCCGGGGACAGTCCGCGCTGCCGGGCGAACTCGACGAACACGTCCGACAGGGGCATGACCGTCGCGCCGCCCGCCAGCGCCATCGCGCACTCGCCGCGCCGCAGCGACTGCGCGGCCAGGTGGATCGCGACCAGCGACGACGAGCAGGCGGTGTCCACGGTGAGCGCGGGCCCGTGCAGGCCGAGCGCGTAGGCGACCCGGCCGGAGGCGACGCTGCCGGAGCTGCCGATGGCCAGGTGGCCCTCGAACTCCTCGGCGACGCGCCGCCGGTTGCCGTAGTTCTGGTAGACCACGCCGGAGAAGACGCCGGTGCCGGTGCCGCGCAGCGACAGCGGGTCGATGCCCGCGCGCTCGACCGCCTCCCAGGAGGTCTCCAGGAGCATCCGGTGCTGCGGGTCGATCGTGACGGCCTCGCGCGGGCCGATGCCGAAGAACCCGGCGTCGAACTCGGCGGCGTCGTGCAGGAACCCGCCCTCGCGGGTGTAGCAGGTGCCCGGCCGGGTCGGGTCGGGGTCGTAGAGCCCGGCCAGGTCCCAGCCGCGGTCGGTGGGGAACCCGGTGATCGCGTCGACGCCGCCGTCCACCAGTTCCCACAGCGCTTCCGGGGTGCGGACGCCGCCGGGGGCGCGGCAGGCCAGGCCGGTGATCGCGATCGGCTCGTGGCCCGCCGACTCCAGGTCGGCGAGCTTGCGCCGCGTCTCGTGCAGGTCGGCGGTGACCCACCGGAGGTAGTCGACCAGCTTCTCGTGGGTCCCGTCGGTCAT；

同源臂右臂序列为：

GGGTGCGCGCGTCTCCAAGGCTCGGGCGGGGCAGGCGGGGCAGGCGGGGTCGTCGGGCAGCGGTTCGTCAGGCGGCGGGTCGGCGGGCGGTGGGTCGTCAGGCGGCGGGTCGTCGGGCGGCGGGTCGGCGGGTGGGTGGGCAGCAGGTGGGTGGGCAGCAGGTGGGTGGGCAGCAGGTGGGTGGGCAGCAGGTGGGTGGGCAGCGGGTGGTCAGGCGGGGGTGGTCAGGTCGGCGTGCAGGGTGGTGGGCAGGTCGGTGCGGTGGGTGACGCGCAGCTTGCGGAACACCCTGGTCAGGTGCTGCTCGACGGTGCTCGGGGTGACGAACAGCTTCTCGGCGATCTGCCGGTTGGTGAGGCCGGTGACGGCCAGCGCGGCGACCTTGCGCTCGGAGCCGGTGAGGCCGCTGGTGTCGTGCGCGACGGGGTCGGCCGCGTCCGGTTCCAGGCGCGCGCACAGCGGTCGCGCGCCGCACGCCCTGGCCAGGTGCCAGGCCCTGCGCAGCACGGCGCGGGCGCGGCGGTGGTCGCCGAGGGCGTGGTGCGCCGCGCCGAGGCAGGCGAGGGTGGCGGCCAGCTCGTAGCGGTCGCCGCAGCGCTCCAGCGCGTCGGCGGCCTCGGCGAGCAGGTGCGGGCGGCGGGTCGGCGGGCTGAGCGGGGCGAGCGCGCGCAGCGCCAGCGCCCTGGGGCGGCCCGCGTCGGCGCCGGTCGTGGCGAGCTGGTCGAACACCAGCCGCCGGGCTCGGTCGTGGTTGCCCAGGCGGGTCCACGCCTCGGCGGCCCCGGTGCGCCACGGCGCGAGGCCCGGCAGGTCGAGGCCCCAGGAGCGCAGGAGGTCGCCGCACGCCAGGAAGTCGGCGAGCGCCGCGTGGTCCCGCCCGGACGCGAGGTGGTGGTGGCCGCGCGCGTGCAGGTAGTGCGGGGCGGCGGGGCCGTCGAAGAGGGCGTCCGGCACGGGCGCGGTGACGTGCCGCCCGGCCTCCCGCCGCCGCCCGCGCAGGGTGTCGGCGAGGATCAGCGAGCCCAGCGGCAGCCCGACGCCCGCGCCCCAGCCGTGCGCGGGGACGGCGTCGAGCGCGGCGCGGGCGTGCCCGGCTGCGCCCGCGAGGTCGCCGAGCCGCAGCGCGATCACCGAGGCGGCGGCGGCGAAGGAGGCGACCCAGGTGGGCGCGCGCCGGGAGCGCGCCTCGTCGAGCAGCCGCGCGCAGGCCCGGTCGGCCTCGACGGCGCGGTCGGCGCGCACCAGGGCGAGCAGCGCGAGCAGCGCGGGTTCCTCGGACCAGGGGGAGGTGTGGCTGAGCTGGGCGTGGCGCAGGTAGTGCGCGGCCTCGGCGGCGGCTCGGCGCTGGTCCCCGAGGACGAACCCGCCGACCAGGCTGGCGGCCTCGCGCAACCACGGGTCGACGCGGCTCGAGGGCGGGGTGGTGGGGTTGAGGGCCGCGGGGTGGGGGTGCCGCGCTGGTGGGCAGCGGTGCGAGAAGCGGAGGTGTGCGGGGCGTT。