[发明专利]一种具有抗癌活性的绿豆多肽的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及绿豆多肽的制备方法，特别涉及一种具有抗癌活性的绿豆多肽的制备方法及应用。

背景技术

绿豆作为我国的传统食品，由于其具有防暑、清凉解渴、消热解毒等功效一直深受人们的喜爱。在中国已有两千余年的栽培史，是重要的药食物同源物质，被誉为“食中要物”，“济世粮谷”，“清热解暑良药”。中医认为：绿豆味甘，性凉，归心经，具有清热解毒解暑除烦、利水消肿、清胆养胃、润肠通便、明目、降血糖、降血压、降血脂、抗肿瘤、抗过敏、保护肝脏和心血管、增强免疫力、排铅等功效，适用于暑热烦渴、里热、小便不利、水肿、皮疹、食物及药物中毒等。

绿豆中含有种类丰富的蛋白质，研究表明绿豆蛋白具有解毒、降低胆固醇抗炎等活性。但是，蛋白质作为大分子物质在消化吸收的工程中往往存在着消化不完全、难以吸收等问题。而多肽无论是吸收效果还是功能活性要远好于蛋白。

因而，本发明研究了制备绿豆多肽的方法，同时发现了其潜在的抗癌活性，特别是抗乳腺癌活性。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种具有抗癌活性的绿豆多肽的制备方法，并通过实验证明，该水解多肽具有抑制人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)的抗癌活性。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

一种具有抗癌活性的绿豆多肽的制备方法，包括以下步骤：

1)取绿豆除杂、清晰、烘干磨粉，过筛，得绿豆粉末；

2)采用碱提酸沉的方法或者物理方法提取膨化绿豆粉中的蛋白质，并干燥蛋白样品；

3)将步骤2)得到的蛋白样品按比例溶于PBS磷酸缓冲液或蒸馏水中，按比例加入一种或多种消化酶进行水解，将得到的水解产物干燥，得多肽产物。

优选地，上述技术方案中，所述步骤1)中还包括：向绿豆粉末中添加适量的水，搅拌均匀，放入挤压膨化设备中进行挤压膨化。

优选地，上述技术方案中，挤压膨化机温度控制分别为：一区80℃-100℃，二区110℃-130℃，三区130℃-160℃，螺杆转速10-20Hz。

优选地，上述技术方案中，所述步骤1)中烘干温度为50℃、烘干后过100目筛。

优选地，上述技术方案中，所述步骤2)中碱提酸沉的方法包括：

21)将绿豆膨化粉与1M氢氧化钠溶液按照按照1：10的固液比进行混合溶解，并用0.1M和氢氧化钠或盐酸溶液调节PH值至11，震荡过夜；

22)将上述得到的混合液离心，得上清液后用0.1M的盐酸调节PH至3.5；

23)在4℃下静置1小时后，离心，冷冻沉淀，干燥，得蛋白样品。

优选地，上述技术方案中，所述22)和23)中离心的条件为5000rap，30min。

优选地，上述技术方案中，所述步骤3)具体为：将冻干得到的蛋白样品按1：20的固液比溶于PH为2的PBS磷酸缓冲液，加入蛋白质量二十分之一的胃蛋白酶，在37℃下酶解15min，调节PH至7.5，再加入蛋白质量二十分之一的胰蛋白酶，在37℃下酶解15min，50℃灭酶20min，将得到的水解产物冷冻干燥，即得绿豆多肽。

一种具有抗癌活性的绿豆多肽的制备方法制备得到的绿豆多肽。

一种具有抗癌活性的绿豆多肽的制备方法制备得到的绿豆多肽在抑制乳腺癌药物中的应用。

优选地，上述技术方案中，所述应用是抑制人乳腺癌细胞的抗癌活性。

本发明上述技术方案，具有如下有益效果：

本发明的绿豆多肽的制备方法简单，易操作，制备中可以选择通过膨化或非膨化两种制备方法均可。通过上述制备方法制备得到的绿豆多肽(MPH/EMPH)，利用MTT法检测MPH对人体多种细胞的活性影响，其中对人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)活性影响特别明显，结果表明浓度低于500μg/ml情况下，MPH对MDA-MB-231细胞无毒性；100μg/mL～450μg/mLMPH均能抑制MDA-MB-231细胞增殖和转移，并促进的AMPKa表达，呈现剂量依赖性，即表明绿豆多肽有抗癌效果。

附图说明

图1为本发明的具有抗癌活性的绿豆多肽的制备方法流程图。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施例进行详细描述，以便于进一步理解本发明。

实施例1

按照10公斤绿豆原料进行生产试验，制备方法如下：

(1)将购置的绿豆除去矿物质颗粒、用清水洗净、50℃烘干并用磨磨碎过100目筛得到绿豆粉末；