[发明专利]基于DNA条形码的海水蟹类物种鉴别方法

说明书

本发明涉及一种物种鉴别方法，特别涉及一种基于DNA条形码的海水蟹类物种鉴别方法。一种 DNA 条形码引物，所述 DNA 条形码引物的核苷酸序列为 SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2。本发明提供的是一种6种不同蟹类的DNA条形码引物，DNA条形码目的片段的PCR产物碱基数为217 bp。本发明通过供试的六种蟹类的DNA条形码目的片段的PCR产物碱基序列进行比对分析，确定6种蟹类各自特异性的DNA条形码碱基序列，建立蟹类物种的分子生物学鉴别方法。

技术领域

本发明涉及一种物种鉴别方法，特别涉及一种基于DNA条形码的海水蟹类物种鉴别方法，更具体涉及一种基于DNA条形码的三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)、红星梭子蟹(P.sanguinolentus)、绵蟹(Dromia dehaani)、日本蟳(Charybdis japonica)、锐齿蟳(C.acuta)和锈斑蟳(C.feriatus)等蟹类的物种鉴别方法。

背景技术

DNA条形码(DNA barcoding)是一段标准的，能快速、高效鉴定物种的DNA序列。这个概念的产生是受零售业中条形码技术应用的启发。DNA条形码技术就像在零售业中广泛运用的商品条形码一样，通过对一个生物实体的一个或多个基因进行扫描，来鉴定物种和发现新种，以期建立起DNA序列和生物物种之间一一对应的关系。随着分子生物技术和计算机技术的发展，DNA条形码——这种新兴的技术已得到许多领域的越来越多的科学家的关注，利用DNA条形码发现新物种或隐存种，鉴定濒危物种和鉴别外来入侵种的工作方兴未艾，并为保护生物多样性做出了巨大的贡献。

根据董聿茂(1991,1998)报道，浙江海域(包括潮间带)分布的经济蟹类有156种，在上述种类中，群体数量较大、经济价值较高的有三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)、红星梭子蟹(P.sanguinolentus)、锈斑蟳(Charybdis feriatus)、细点圆趾蟹(Ovalipes punctatus)、日本蟳(C.japonica)、武士蟳(C.miles)、光掌蟳(C.riversandersoni)、双斑蟳(C.bimaculata)以及分布在河口、港湾的拟穴青蟹(Scyllaserrata)、中华绒螯蟹(Eriochier sinensis)。由于蟹类肉质鲜美、营养丰富、利用价值高，深受国内外消费者喜爱。随着人们对大型经济蟹类的需求量日益增加，三疣梭子蟹、日本蟳等已成为我省海水养殖业的主导品种和重要的出口创汇产品。

宋海棠等(2006)认为在浙江沿海的蟹类资源相对丰富，具备较高的物种多样性。正确认识和区分物种，特别是对那些具有保护意义的种类，分类鉴定工作就显得尤其重要。一般而言，依靠传统经验为主的海洋生物形态鉴定方法具有较大局限性，比如受物种性别和发育阶段的限制；许多复合单元即隐存种难以准确鉴定；表型可塑性和遗传多样性容易导致不正确的鉴定等。当传统的分类学受到阻碍时，DNA条形码技术就可以发挥其优势：①利用生物体零散组织鉴别物种；②针对生物体各个生长发育阶段鉴别物种；③准确区分形态相似的不同物种；④鉴定工作更加精准和鉴定周期更加缩短；⑤鉴定范围没有限制。DNA条形码已经成为生态学研究的重要工具，不仅用于物种鉴定，同时也帮助生物学家进一步了解生态系统内发生的相互作用。但是目前国内外尚无利用DNA微型码鉴定蟹类物种的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于DNA条形码的海水蟹类物种鉴别方法，该方法具有耗时短，操作简便，特异性强的优点。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种DNA条形码引物，所述DNA条形码引物的核苷酸序列为：

CS 217-F:GGACGATAAGACCCTATAAA(SEQ ID NO：1)；

CF 217-R:ATTACGCTGTTATCCCTAAA(SEQ ID NO：2)。本发明提供的是一种6种不同蟹类的DNA条形码引物，DNA条形码目的片段的PCR产物碱基数为217bp。