[发明专利]一种调控裂褶菌发酵产物裂褶多糖分子量的方法

权利要求书

1.一种调控裂褶菌发酵产物裂褶多糖分子量的方法，其特征在于包括如下步骤：

1)发酵种子液的制备：取裂褶菌(Schizophyllum commune Fr.)斜面菌种采用PDA培养基试管斜面接种培育5-7天后，得活化的斜面种子；取经活化的斜面种子在液体培养基中培养3-4天，得发酵种子液；

2)裂褶菌发酵：将种子培养液接入发酵罐中发酵，0-36h为发酵初期阶段，发酵条件控制为：搅拌转速100-400r/min，通气量0.20-0.8vvm，26-28℃，溶解氧DO维持在35-45％；

37-84h为发酵中期阶段，发酵条件控制为：搅拌转速200-350r/min，调节发酵液pH为3.8-4.5，通气量为0.5-1.5vvm，维持DO30-35％，温度26-28℃，通过监测发酵罐中还原糖的含量，当葡萄糖量降至15-18g/L范围时，向发酵罐中补充葡萄糖至发酵罐中葡萄糖含量达到20-28g/L；共计补料3-5次；

85-96h为发酵后期阶段，发酵条件控制为：搅拌转速250-400r/min，调节发酵液pH为4.5-5.5，温度提高至40-45℃，通气量为0.5-1.0vvm，使溶氧DO维持在25-30％，继续发酵12-18小时；

3)裂褶多糖的分离纯化：发酵结束后放料，除去菌丝体；发酵液浓缩至原来的体积的1/2-1/4，加入乙醇沉淀，将沉淀用蒸馏水重新溶解，再采用分子量为50-100kDa的超滤膜过滤除蛋白质及小分子，得精制裂褶多糖。

2.根据权利要求1所述的调控裂褶菌发酵产物裂褶多糖分子量的方法，其特征在于，所述裂褶菌(Schizophyllum commune Fr.)斜面菌种采用PDA培养基试管斜面接种培育是在超净台中采用接种环从斜面菌种菌丝体上取样并在PDA培养基试管斜面上划线接种，将已接种好的裂褶菌(Schizophyllum commune Fr.)试管斜面放入26-28℃的培养箱中培养5-7天。

3.根据权利要求1所述的调控裂褶菌发酵产物裂褶多糖分子量的方法，其特征在于，所述PDA培养基由如下方法制备：将马铃薯去皮，切成小块，加水煮沸30-40分钟，用双重纱布过滤，滤汁中加白糖与琼脂，煮沸使琼脂溶解，补足水量至1000mL，分装后0.1MPa灭菌20-30分钟以上；每1000mL水中，马铃薯用量为200g，白糖用量为20g，蛋白胨用量为5g，琼脂用量为20g。

4.根据权利要求1所述的调控裂褶菌发酵产物裂褶多糖分子量的方法，其特征在于，以营养成分浓度计，所述液体培养基的组成为：葡萄糖30-40g/L，酵母膏2.5-3g/L，KH₂PO₄0.5-1.0g/L，MgSO₄·7H₂O 0.4-0.5g/L；按比例配制后在121℃灭菌20-30min备用。

5.根据权利要求1所述的调控裂褶菌发酵产物裂褶多糖分子量的方法，其特征在于，所述取经活化的斜面种子在液体培养基中培养是用接种针挑取菌丝接入装有液体培养基中，在恒温摇床中26-28℃，180-200rpm条件下培养3-4天。

6.根据权利要求1所述的调控裂褶菌发酵产物裂褶多糖分子量的方法，其特征在于，所述发酵种子液以发酵罐装液量体积的8-10％接种量接入发酵罐培育，装料系数控制为0.6-0.75。

7.根据权利要求1所述的调控裂褶菌发酵产物裂褶多糖分子量的方法，其特征在于，所述调节发酵液pH为3.8-4.5是采用0.2-0.5mol/L的NaOH或HCL溶液调节。

8.根据权利要求1所述的调控裂褶菌发酵产物裂褶多糖分子量的方法，其特征在于，所述调节发酵液pH为4.5-5.5是采用0.5mol/L的NaOH溶液调节。

9.根据权利要求1所述的调控裂褶菌发酵产物裂褶多糖分子量的方法，其特征在于，所述乙醇的体积浓度为95％；乙醇的加入量为步骤5)浓缩液体积的3-4倍。