[发明专利]一种调控裂褶菌发酵产物裂褶多糖分子量的方法

说明书

本发明公开了一种调控裂褶菌发酵产物裂褶多糖分子量的方法；该方法取裂褶菌斜面菌种采用PDA培养基试管斜面接种培育，制得发酵种子液；将种子培养液接入发酵罐中发酵，0‐36h为发酵初期阶段，发酵条件控制为：搅拌转速100‐400r/min，通气量0.20‐0.8vvm，26‐28℃；37‐84h为发酵中期阶段；85‐96h为发酵后期阶段，分别控制发酵条件，发酵结束后放料，除去菌丝体；浓缩，沉淀，过滤，得精制裂褶多糖。本发明方法利用菌体自身分泌的酶对多糖进行降解，不仅将传统经发酵获得的分子量较大溶解性较差的粗多糖分离提纯后再进行降解的工序大大简化，而且提高产品收率，降低了生产成本。

技术领域

本发明涉及裂褶多糖，特别是涉及一种调控裂褶菌发酵产物裂褶多糖分子量的方法，具体是涉及一种利用裂褶菌发酵产裂褶多糖时体系附加产内切β-1，3-D-葡聚糖酶对多糖进行酶解从而调节发酵产物裂褶多糖分子量的技术。

背景技术

裂褶多糖(SPG)是裂褶菌发酵得到的水溶性多糖，具有抑制肿瘤、抗菌消炎、抗辐射、提高机体免疫力等多种生理活性。但发酵得到的裂褶多糖的分子量大(一般为4000kDa以上)、难于重新溶解、不利于生物吸收等特性，极大的限制了其应用，需要对其进行降解，适度降低分子量，但过度降解会造成其生物活性丧失。

目前现有技术都是先通过裂褶菌深层发酵获得裂褶多糖，对粗多糖进行纯化，再对多糖进行降解。目前裂褶多糖降解方法主要有化学降解法、物理降解法和生物降解法。一般裂褶多糖的化学降解法主要是酸降解，物理降解法主要是超声波降解，而其中生物酶解法是一种较好的降解方法，但很难找到一种专一性的酶来满足裂褶多糖降解改性的需要，一方面这种酶必须是β-1，3-内切葡聚糖酶，另一方面很多酶会将多糖降解成50kDa以下(产物失去活性)而不能满足要求。

发明内容

针对目前发酵产生的裂褶多糖分子量大，溶解性差，但又较难找到合适的酶对其进行降解改性，本发明利用裂褶菌发酵产裂褶多糖体系中同时附加产内切葡聚糖酶的特性，控制条件直接经发酵一步得到分子量适宜溶解性好的改性裂褶多糖。

本发明就是利用裂褶菌在发酵过程中发酵体系本身产生的内切葡聚糖酶对发酵已产生的分子量太大的裂褶多糖进行适度降解，从而获得溶解性较好的裂褶多糖。不仅解决了专一性酶的问题，而且可在发酵罐中一步实现裂褶多糖的发酵制备及降解改性，直接获得分子量适宜溶解性好的裂褶多糖，大大简化了制备步骤并降低成本。

本发明通过调节发酵条件，使发酵不同阶段分别进行裂褶多糖的积累和内切β‐1,3‐葡聚糖酶的合成，并使产生的内切β‐1,3‐葡聚糖酶对裂褶多糖进行酶解，实现裂褶多糖的发酵和降解改性一体化，从而通过发酵一步即获得分子量降低、溶解性好的裂褶多糖，实现裂褶菌发酵产物裂褶多糖分子量的调控。

裂褶菌液体深层发酵获得裂褶多糖，在发酵的初始阶段，通过控制适宜的发酵条件，主要使裂褶菌生长并产生裂褶多糖。

随着裂褶多糖的产率的增加和碳源的消耗，通过调节发酵条件，使发酵进入中期阶段，即进一步增加多糖并同时进行内切葡聚糖酶的积累的阶段。

在发酵的后期阶段，进一步调节发酵条件，使在第二阶段产生的酶对第一阶段产生的多糖进行酶解，从而获得分子量较合适，溶解度较好的裂褶多糖。

本发明目的通过如下技术方案实现：

一种调控裂褶菌发酵产物裂褶多糖分子量的方法，包括如下步骤：

1)发酵种子液的制备：取裂褶菌(Schizophyllum commune Fr.)斜面菌种采用PDA培养基试管斜面接种培育5‐7天后，得活化的斜面种子；取经活化的斜面种子在液体培养基中培养3-4天，得发酵种子液；其中，裂褶菌(Schizophyllum commune Fr.)斜面菌种于2014年10月购自于广东省微生物菌种保藏中心。