[发明专利]纳米颗粒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种纳米颗粒及其制备方法：将有机溶剂与表面活性剂混合，得A液；第一反应物溶液与功能物质溶液混合，得B液；第二反应物溶液与功能物质溶液混合，得C液；第二反应物与第一反应物接触后能够形成沉淀；混匀A液、B液得D液；混匀A液、C液，并向所得混合溶液中加入DOPA溶液混匀，得E液；将E液加入D液，对所得混合物离心，收集沉淀，得单层膜纳米颗粒；制备单层膜纳米颗粒的分散液，并向分散液中加入DOPC、胆固醇的混合物，或者加入DOTAP、胆固醇的混合物，所得悬浮颗粒溶液中的颗粒即为双层膜纳米颗粒。本发明通过分步混合有机溶剂、表面活性剂、第一反应物溶液、功能物质溶液，提高了携带功能物质的纳米颗粒对靶细胞的转染效率。

技术领域

本发明涉及生命科学技术领域，特别是涉及一种纳米颗粒及其制备方法。

背景技术

纳米颗粒是一种中间带有空腔的纳米材料，可以将小分子药物、siRNA、抗体等包裹再空腔里面，导入到目标细胞中。TIL细胞(T细胞)是一种淋巴细胞，将病人的癌症组织和病人的T细胞一起培养，然后让这种淋巴细胞扩增之后回输病人体内，是现有杀死癌细胞的技术。但是，癌细胞的表面会存在一种叫做PD-L1的蛋白，这种PD-L1的蛋白会和T细胞的PD-1蛋白一起结合，就会抑制T细胞对癌细胞的杀伤。因此，想要T细胞能高效杀伤癌细胞，就要想办法把T细胞的PD-1和癌细胞的PD-L1降低就可以了。

目前主要是分别将对PD-L1、PD-1有抑制作用的功能物质通过载体转染至T细胞、癌细胞，从而实现T细胞的PD-1和癌细胞的PD-L1降低。但目前的载体普遍存在转染效率低的缺点。

发明内容

基于此，有必要针对现有纳米颗粒对悬浮细胞转染低效的问题，提供一种高效的纳米颗粒及其制备方法。

本发明的目的之一是提供一种纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：

将有机溶剂与表面活性剂混合，得A液；

第一反应物溶液与功能物质溶液混合，得B液；

第二反应物溶液与功能物质溶液混合，得C液；所述第二反应物与所述第一反应物接触后能够形成沉淀；

混匀所述A液、所述B液得D液；

混匀所述A液、所述C液，并向所得混合溶液中加入DOPA(多巴胺)的氯仿溶液混匀，得E液；

将所述E液加入所述D液，对所得混合物离心，收集沉淀，得单层膜纳米颗粒；

制备单层膜纳米颗粒的分散液，并向所述分散液中加入DOPC(1,2-二油酰基磷脂酰胆碱)、胆固醇的混合物，或者加入DOTAP(2-二油酰基羟丙基-3-N,N,N-三甲铵)、胆固醇的混合物，所得悬浮颗粒溶液中的颗粒即为双层膜纳米颗粒。

在其中一些实施例中，所述第一反应物溶液为钙盐溶液，所述第二反应物溶液为磷酸盐溶液或者焦磷酸盐溶液，所述第一反应物、第二反应物的钙、磷的物质量比为(25～400)：1。本发明实施例通过控制钙磷的数量比，能够获得很好的获得纳米颗粒核，不均颗粒大小均一、而且稳定性良好，不易发生凝聚。如果超出了本申请实施例的限定，要么无法形成纳米颗粒核，要么是所形成的那么颗粒核凝聚一团，不易进行后续的裹膜操作。

在其中一些实施例中，所述钙盐溶液的浓度为4.5～5.5M；所述磷酸盐溶液或者焦磷酸盐溶液的浓度为45～55mM。本发明实施例通过采用4.5～5.5M氯化钙溶液，可以进一步提高第一反应物与第二反应物结合产生的沉淀的均一性，进而提高纳米颗粒的均一性。

在其中一些实施例中，所述钙盐溶液包括氯化钙溶液、硝酸钙溶液、葡萄糖酸钙溶液；所述磷酸盐溶液包括磷酸氢二钾溶液、磷酸氢二铵溶液、磷酸二氢铵溶液、磷酸氢钙溶液、磷酸钙溶液、磷酸二氢钠溶液、磷酸氢二钠溶液、磷酸钠溶液；所述焦磷酸盐溶液包括焦磷酸钙溶液、酸式焦磷酸钠溶液、焦磷酸钠溶液。