[发明专利]一种鉴别真假蜂蜜的核磁共振去偶氢谱方法

权利要求书

1.一种鉴别真假蜂蜜的核磁共振去偶氢谱方法，其特征在于包括以下步骤：

1)蜂蜜样品制备：

2)蜂蜜溶液样品的NMR检测；将已经制备好的蜂蜜溶液样品核磁管置于500MHzAgilentNMRSystem核磁共振谱仪中，用常规单脉冲序列采集一张¹H NMR谱，获得谱线的线宽，为谱宽参数设置提供依据，同时线宽值反映了磁场均匀性情况；向核磁共振谱仪操作软件中导入事先编译好的ZS序列以及tnnoesy序列，设置合理参数，进行数据采样，其中，ZS序列所得到的自由感应衰减信号需要通过事先编译好的数据处理程序进行自由感应衰减信号拼接重组获得新的FID，将这个拼接后的FID和tnnoesy序列所得到的FID分别进行傅里叶变换，得到所检测蜂蜜样品的去偶谱图和常规谱图；

3)实验数据预处理；

4)实验结果处理分析。

2.如权利要求1所述一种鉴别真假蜂蜜的核磁共振去偶氢谱方法，其特征在于在步骤1)中，所述蜂蜜样品制备，将所需要检测的蜂蜜配制成为用核磁共振谱仪检测的溶液样品。

3.如权利要求1所述一种鉴别真假蜂蜜的核磁共振去偶氢谱方法，其特征在于在步骤1)中，所选用的蜂蜜由江苏省出入境检验检疫局动植物与食品检测中心所提供，花源为洋槐和油菜，产地有江苏、四川和河南。

4.如权利要求1所述一种鉴别真假蜂蜜的核磁共振去偶氢谱方法，其特征在于在步骤1)中，假蜂蜜为检测中心已经证实的由市场上收集到的掺入不同比例大米糖浆、转化糖浆的掺假蜂蜜；配样方法为称取蜂蜜100mg，加入500μL含0.05％TSP(2,2,3,3-四氘代三甲基硅烷丙烯酸)的磷酸缓冲液，使用振荡器将其混匀；在室温下静置5min后，经离心10min，转速10000rpm，取其上层清液500μL加入到5mm核磁管中并密封，所述磷酸缓冲液的组成为0.60mol/L,K₂HPO₄/NaH₂PO₄,pH＝4.92,99.9％D₂O。

5.如权利要求1所述一种鉴别真假蜂蜜的核磁共振去偶氢谱方法，其特征在于在步骤3)中，所述实验数据预处理，将实验所得到的谱图进行相位基线调整、去除溶剂峰、分段积分和归一化处理得到积分数据供后续建模分析。

6.如权利要求1所述一种鉴别真假蜂蜜的核磁共振去偶氢谱方法，其特征在于在步骤3)中，将从步骤2)中所得到的ZS去偶谱和常规tnnoesy谱用分别用MestReNova软件进行手动相位矫正、多点基线矫正、定标、谱峰对齐和分段积分等数据预处理操作，对获得的积分数据进行归一化处理，归一化后的积分数据转存为ASCⅡ格式以供后续统计建模。

7.如权利要求5所述一种鉴别真假蜂蜜的核磁共振去偶氢谱方法，其特征在于在步骤4)中，所述实验结果处理分析，将积分数据导入SIMCA-P+软件中进行主成分分析和正交偏最小二乘法分析，找出真假蜂蜜差异物，判断掺假方式；建模分析在SIMCA-P+软件上进行，采用主成分分析和正交偏最小二乘法判别分析。

8.如权利要求6所述一种鉴别真假蜂蜜的核磁共振去偶氢谱方法，其特征在于在步骤4)中，将步骤3)中所得ASCⅡ积分数据导入SIMCA-P+软件，使用中值标准化Ctr方法进行数据预处理，之后进行PCA，获得各组的聚类信息，真蜂蜜和掺假蜂蜜两组聚集，即组内差异小而组间差异大，获取到原始输入变量中相关程度最大的成分，以原始数据作为X变量，组别作为响应变量Y进行OPLS-DA，去除原始数据X变量中与因变量Y无关的信息，将OPLS数据用MALTLAB软件进行处理后画出分析模型的负载图，通过负载图和OPLS分析得到的变量投影重要性这一参数得到对组间差异即真假蜂蜜之间差异影响最大的积分区间，对应于谱图上即为相应化学位移值所对应的谱峰，进行谱峰归属确定差异代谢物；所得结果为引起差异代谢物主要为果糖，其次为α-葡萄糖、β-葡萄糖，判断为掺入糖浆，与实际样品掺假情况吻合。