[发明专利]一种鉴定牵牛属及近缘属的分类地位和物种的方法及用途有效
申请号: | 201710887514.7 | 申请日: | 2017-09-27 |
公开(公告)号: | CN107557489B | 公开(公告)日: | 2021-02-09 |
发明(设计)人: | 邵秀玲;张伟;范晓虹;吴兴海;厉艳;张京宣;宋涛;王简 | 申请(专利权)人: | 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
主分类号: | C12Q1/6895 | 分类号: | C12Q1/6895 |
代理公司: | 青岛清泰联信知识产权代理有限公司 37256 | 代理人: | 高洋 |
地址: | 266002 山*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 鉴定 牵牛 近缘 分类 地位 物种 方法 用途 | ||
1.一种鉴定牵牛属及近缘属的分类地位和物种的方法,其特征在于:包括以下步骤:
步骤1:提取待测植物的基因组DNA;以待测植物的基因组DNA为模板,利用分别以叶绿体DNA的rbcL基因和核糖体DNA的ITS基因为分子标记的引物进行PCR扩增,对PCR扩增产物进行双向测序,对序列进行拼接和纠正,获取得到序列矩阵,其中,所述rbcL基因的上游引物的序列为SEQ ID NO:1所示,下游引物的序列为SEQ ID NO:2所示,所述ITS基因的上游引物的序列为SEQ ID NO:3所示,下游引物的序列为SEQ ID NO:4所示;
步骤2:基于所述序列矩阵建立进化树,比较待测植物在进化树的位置和支系情况;
步骤3:基于所述序列矩阵建立DNA条形码,确定DNA条形码的间隔区的大小和位置;
步骤4:分别取以rbcL基因和ITS基因作为分子标记获取的步骤2和步骤3的鉴定结果进行比对,如果鉴定结果一致,则该鉴定结果为鉴定待测植物的分类地位和物种的结果,所述结果包括:
如进化树显示支系特征各自为单系,则步骤2鉴定多个待测物种之间属于不同分类地位和物种,如进化树显示支系数量为多个且每个支系中同时混杂这多个待测物种,则步骤2鉴定多个待测物种之间属于相同分类地位和物种;
如进化树显示支系数量为多个,且满足每个支系中同时混杂着多个待测物种,当多个支系之间存在产生杂交的两个物种,则步骤2鉴定多个待测物种之间属于相同分类地位和物种;
当DNA条形码中有间隔,则步骤3鉴定多个待测物种之间不属于相同分类地位和物种;当DNA条形码中无间隔,则步骤3鉴定多个待测物种之间属于相同分类地位和物种。
2.根据权利要求1所述的鉴定牵牛属及近缘属的分类地位和物种的方法,其特征在于:所述rbcL基因在步骤1中的扩增程序为:94℃预热4min;94℃30s,50℃30s,72℃1.0min,36个循环;72℃10min。
3.根据权利要求1所述的鉴定牵牛属及近缘属的分类地位和物种的方法,其特征在于:所述构建进化树的方法为邻接法。
4.一种权利要求1~3任一项所述的鉴定牵牛属及近缘属的分类地位和物种的方法在鉴定裂叶牵牛(Pharbitis hederacea Jacq.)、牵牛(Pharbitis nil(L.)Roth.)和圆叶牵牛(Pharbitis purpurea(L.)Roth)的分类地位和物种的应用。
5.一种权利要求1~3任一项所述的鉴定牵牛属及近缘属的分类地位和物种的方法在鉴定中药材牵牛子中的应用。
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