[发明专利]用于乳粉中双歧杆菌菌株鉴定的SNP位点组合

权利要求书

1.用于乳粉中双歧杆菌菌株鉴定的SNP位点组合，其特征在于，所述组合包括4个SNP位点，分别为BXY位点、HIK1位点、HIK2位点和YKE位点，

所述BXY位点如下：

1)BXY位点为动物双歧杆菌乳双歧杆菌亚种DSM 10140全基因组的F链5’端起第617884位碱基，其碱基为C；

2)BXY位点为动物双歧杆菌乳双歧杆菌亚种Bb-12全基因组的F链5’端起第1253257位碱基，其碱基为C；

3)BXY位点为动物双歧杆菌乳双歧杆菌亚种B1-04全基因组的F链5’端起第617882位碱基，其碱基为C；

4)BXY位点为动物双歧杆菌乳双歧杆菌亚种Bi-07全基因组的F链5’端起第617883位碱基，其碱基为T；

所述HIK1位点如下：

1)HIK1位点为动物双歧杆菌乳双歧杆菌亚种DSM 10140全基因组的F链5’端起第776139位碱基，其碱基为C；

2)HIK1位点为动物双歧杆菌乳双歧杆菌亚种Bb-12全基因组的F链5’端起第1411376位碱基，其碱基为T；

3)HIK1位点为动物双歧杆菌乳双歧杆菌亚种B1-04全基因组序的F链5’端起第776136位碱基，其碱基为T；

4)HIK1位点为动物双歧杆菌乳双歧杆菌亚种Bi-07全基因组的F链5’端起第776137位碱基，其碱基为T；

所述HIK2位点如下：

1)HIK2位点为动物双歧杆菌乳双歧杆菌亚种DSM 10140全基因组的R链3’端起第777041位碱基，其碱基为A；

2)HIK2位点为动物双歧杆菌乳双歧杆菌亚种Bb-12全基因组的R链3’端起第1412278位碱基，其碱基为C；

3)HIK2位点为动物双歧杆菌乳双歧杆菌亚种B1-04全基因组的R链3’端起第777038位碱基，其碱基为A；

4)HIK2位点为动物双歧杆菌乳双歧杆菌亚种Bi-07全基因组的R链3’端起第777039位碱基，其碱基为A；

所述YKE位点如下：

1)YKE位点为动物双歧杆菌乳双歧杆菌亚种DSM 10140全基因组的R链3’端起第839428位碱基，其碱基为T；

2)YKE位点为动物双歧杆菌乳双歧杆菌亚种Bb-12全基因组的R链3’端起第1474481位碱基，其碱基为T；

3)YKE位点为动物双歧杆菌乳双歧杆菌亚种B1-04全基因组的R链3’端起第839425位碱基，其碱基为C；

4)YKE位点为动物双歧杆菌乳双歧杆菌亚种Bi-07全基因组的R链3’端起第839426位碱基，其碱基为C。

2.一种用于鉴定乳粉中双歧杆菌菌株的HRM方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一：分别以含有权利要求1所述的BXY位点、HIK1位点、HIK2位点和YKE位点的DNA序列为模板，进行PCR扩增，获得PCR扩增产物；扩增循环结束后增加HRM分析步骤，建立高分辨率熔解曲线标准曲线；

步骤二：以待测样品的DNA为模板，进行PCR扩增，获得PCR扩增产物；扩增循环结束后增加HRM分析步骤，建立高分辨率熔解曲线样品曲线；

步骤三：通过标准菌株和样品中菌株的高分辨率熔解曲线鉴定或检测乳粉中双歧杆菌到菌株水平；

其中，用于HRM扩增的反应体系中含有动物双歧杆菌区分SNP位点扩增引物；

所述的含有BXY位点的DNA序列如SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ IDNO：12所示；

所述的含有HIK1位点的DNA序列如SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQID NO：16所示；

所述的含有HIK2位点的DNA序列如SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQID NO：20所示；

所述的含有YKE位点的DNA序列如SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ IDNO：24所示；

所述动物双歧杆菌区分SNP位点扩增引物如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示。