[发明专利]一种双酚A荧光检测试纸条、制备方法及应用

权利要求书

1.一种双酚A荧光检测试纸条，其特征在于，所述双酚A荧光检测试纸条包括在衬板上依次粘贴搭接的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫；所述结合垫为荧光纳米微球-适配体①结合垫，所述硝酸纤维膜上间隔布置有检测标记和参照标记，所述检测标记包含以链霉亲和素-生物素-适配体②在硝酸纤维膜上印制的检测线，所述参照标记包含以链霉亲和素-生物素-适配体③在硝酸纤维膜上印制的参照线，所述检测线与参照线平行布置且检测线靠近样品垫。

2.根据权利要求1所述的双酚A荧光检测试纸条，其特征在于，适配体①、适配体②和适配体③的核苷酸序列依次为：

适配体①：5’-CCG GTG GGT GGT CAG GTG GGA TAG CGT TCC GCG TAT GGC CCA GCGCAT CAC GGG TTC GCA CCA AAA AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA-NH₂-3’；

适配体②：5’-TGG TGC GAA CCC GTG ATG CGC TGG GCC ATA CGC GGA ACG CTA TCCCAC CTG ACC ACC CAC CGG-Biotin-3’；

适配体③：5’-Biotin-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-3’。

3.根据权利要求1所述的双酚A荧光检测试纸条，其特征在于，所述结合垫为：荧光纳米微球与氨基修饰的适配体①按照质量比为1:10在37℃下反应1.5小时得到荧光纳米微球-适配体①，将荧光纳米微球-适配体①均匀地涂抹在玻璃纤维膜上，冻干后形成荧光纳米微球-适配体①结合垫。

4.根据权利要求1所述的双酚A荧光检测试纸条，其特征在于，所述检测线为：生物素修饰适配体②与链霉亲和素按照摩尔比为1:10在37℃下反应30min得到链霉亲和素-生物素-适配体②，在硝酸纤维素膜上用链霉亲和素-生物素-适配体②溶液划线得到包含链霉亲和素-生物素-适配体②的线为检测线；

所述参照线为：生物素修饰适配体③与链霉亲和素按照摩尔比为1:10在37℃下反应30min得到链霉亲和素-生物素-适配体③，在硝酸纤维素膜上用链霉亲和素-生物素-适配体③溶液划线得到包含链霉亲和素-生物素-适配体③的线为参照线。

5.一种双酚A荧光检测试纸条的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：

(1)荧光纳米微球与氨基修饰的适配体①按照质量比为1:10在37℃下反应1.5小时，得到荧光纳米微球-适配体①；将荧光纳米微球-适配体①均匀地涂抹在玻璃纤维膜上，冻干后形成荧光纳米微球-适配体①结合垫；

(2)生物素修饰的适配体②和生物素修饰的适配体③分别与链霉亲和素按照摩尔比为1:10在37℃下反应30min，得到链霉亲和素-生物素-适配体②和链霉亲和素-生物素-适配体③；在硝酸纤维膜上用链霉亲和素-生物素-适配体②和链霉亲和素-生物素-适配体③的溶液分别划两条平行的线，包含链霉亲和素-生物素-适配体②的线为检测线，包含链霉亲和素-生物素-适配体③的线为参照线；

(3)在衬板上依次粘贴搭接样品垫、荧光纳米微球-适配体①结合垫、包含链霉亲和素-生物素-适配体②的检测线和包含链霉亲和素-生物素-适配体③的参照线的硝酸纤维素膜以及吸收垫；相邻两粘贴物之间的重叠部分长度为2mm，得到的荧光检测试纸条干燥封装并在4～25℃下保存。

6.一种双酚A荧光检测试纸条的应用，其特征在于，所述双酚A荧光检测试纸条的应用基于权利要求1-4中任意一项所述的双酚A荧光检测试纸条，所述双酚A荧光检测试纸条的应用包括：将双酚A荧光检测试纸条的吸收垫端插入至待检测的样品中，待检测的样品溶液高度不要超过样品垫，同时设置一组空白对照组，等待30s后取出平放20min，在紫外灯下用肉眼观察检测结果；

如果硝酸纤维素膜上的检测线和参照线同时显荧光，且检测线荧光信号强度强于或与参照线相当，则表明检测样品中双酚A含量低于10ppb，检测结果为阴性；

如果硝酸纤维素膜上的检测线和参照线同时显荧光，且检测线荧光信号强度浅于参照线，则表明样品中双酚A含量超过10ppb，检测结果为阳性；

如果硝酸纤维素膜上的检测线显荧光、参照线不显荧光，检测结果无效。