[发明专利]一种双酚A荧光检测试纸条、制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种双酚A荧光检测试纸条、制备方法及应用，双酚A荧光检测试纸条包括在衬板上依次粘贴搭接的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫；所述结合垫为荧光纳米微球‑适配体①结合垫，所述硝酸纤维膜上间隔布置有检测标记和参照标记，所述检测标记包含以链霉亲和素‑生物素‑适配体②在硝酸纤维膜上印制的检测线，所述参照标记包含以链霉亲和素‑生物素‑适配体③在硝酸纤维膜上印制的参照线，所述检测线与参照线平行布置且检测线靠近样品垫。本发明采用竞争法的原理，通过试纸条上检测线和参照线的显色程度来检测待测样品中双酚A的含量，检测快速、准确，30min内即可以完成检测，适用于企业或者政府监管部门的现场快速检测。

技术领域

本发明属于荧光检测技术领域，尤其是涉及一种双酚A荧光检测试纸条、制备方法及应用。

背景技术

双酚A是一种环境内分泌干扰物质，由于其明确的食品安全风险，近年来备受关注。双酚A具有类似雌激素的作用，通过一些途径如污染水源、食物或经皮肤吸收进入机体后，可以干扰身体内分泌激素的合成、释放和代谢等，从而使机体内分泌失调，出现性早熟等疾病。双酚A作为塑料包装的合成原料，与复杂基质食品密切、长时间接触过程中可能发生迁移，从而带来潜在的食品安全隐患。

双酚A的测定主要有高效液相色谱法、高效液相色谱-串联质谱法等精密仪器检测的方法，检测成本较高；其酶联免疫法操作简单，检测快速，但是生物抗体制备繁琐耗时。

核酸适配体是近年来发展起来的一类新型生物识别分子，是通过体外筛选得到的一组能与靶分子如蛋白质、有机物或金属离子等高亲和、高特异性结合的寡核苷酸序列(DNA或RNA)。由于其具有分子量较小、可化学合成、稳定性好等优点受到了研究者的广泛关注。开发基于核酸适配体的快速检测试纸条为快速检测方法的研究提供了新思路。

发明内容

本发明的第一个目的在于，针对现有技术中存在的不足，提供一种双酚A荧光检测试纸条。

为此，本发明的上述目的通过以下技术方案来实现：

一种双酚A荧光检测试纸条，所述双酚A荧光检测试纸条包括在衬板上依次粘贴搭接的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫；所述结合垫为荧光纳米微球-适配体①结合垫，所述硝酸纤维膜上间隔布置有检测标记和参照标记，所述检测标记包含以链霉亲和素-生物素-适配体②在硝酸纤维膜上印制的检测线，所述参照标记包含以链霉亲和素-生物素-适配体③在硝酸纤维膜上印制的参照线，所述检测线与参照线平行布置且检测线靠近样品垫。

为了取得进一步的技术效果，本发明还可以采用以下进一步的技术方案：

优选地，适配体①、适配体②和适配体③的核苷酸序列依次为：

适配体①：5’-CCG GTG GGT GGT CAG GTG GGA TAG CGT TCC GCG TAT GGC CCAGCG CAT CAC GGG TTC GCA CCA AAA AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA-NH₂-3’；

适配体②：5’-TGG TGC GAA CCC GTG ATG CGC TGG GCC ATA CGC GGA ACG CTATCC CAC CTG ACC ACC CAC CGG-Biotin-3’；

适配体③：5’-Biotin-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-3’。

优选地，所述结合垫为：荧光纳米微球与氨基修饰的适配体①按照质量比为1:10在37℃下反应1.5小时得到荧光纳米微球-适配体①，将荧光纳米微球-适配体①均匀地涂抹在玻璃纤维膜上，冻干后形成荧光纳米微球-适配体①结合垫。