[发明专利]一种茼蒿抑菌活性单体的制备方法

说明书

本发明公开了一种茼蒿抑菌活性单体及其使用方法，属于活性物质的分离及使用方法技术领域，该茼蒿抑菌活性单体通过茼蒿茎叶预处理、浸提、大孔树脂柱层析、C18中压色谱分离、葡聚糖凝胶LH‑20柱层析、半制备液相分离处理。本发明所提出一种茼蒿抑菌活性单体，其能够提取高效的抑菌活性的单体，可以很好地抑制西瓜枯萎病菌，具有良好广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及活性物质的分离及使用方法技术领域，更具体的，涉及一种茼蒿抑菌活性的制备方法。

背景技术

西瓜枯萎病(Watermelon Fusarium wilt)又名蔓割病、萎凋病、萎蔫病，被称为“西瓜癌症”，由半知菌亚门真菌—西瓜尖镰孢菌[Fusarium oxysporum f.sp.niveum(E.F.Smith)Wollen]侵染所致，是国内外普遍发生的一种毁灭性的土传病害。由于西瓜栽培面积迅速扩大，导致重茬西瓜面积增多，西瓜枯萎病的发生日趋普遍和严重，给西瓜生产带来巨大的经济损失和资源浪费。枯萎病可造成西瓜产量下降30％～40％，重病地块减产80％以上，甚至绝产。因此，西瓜枯萎病的有效防治，直接影响到西瓜产业的健康发展。

长期以来，人们主要通过农业防治、抗病育种、生物防治、化学防治等方法防治西瓜枯萎病。化学防治具有见效快、效果好的特点。各地对西瓜枯萎病的药剂防治工作都比较重视，筛选和研制出了一批具有一定防效的化学药剂，如菌毒清、KT乳剂、甲霜灵锰锌、恶霉灵、40％瓜枯宁等对西瓜枯萎病都有一定的防治效果。随着科学技术的进步和检测分析手段的完善，发现过去认为安全的一些化学杀菌剂有致癌或潜在致癌、致突变、致畸的可能性。另外，长期使用化学杀菌剂，容易使病原菌对其产生抗药性，降低防治效果，污染环境。公众对大剂量使用化学杀菌剂对生态环境和人体健康带来的危害也日益关注。因此，寻找广谱、高效、低毒、安全的杀菌剂，特别是从天然植物中研究和筛选具有抑菌效果，对人体健康和生态环境无害的抑菌活性成分具有十分重要的意义。

茼蒿(Chrysanthemum Coronarium L.var.Spatiosum Bailer)是我国的传统菊科绿叶蔬菜，在南北各地均有栽培。现代药理研究表明，茼蒿具有抗菌、消毒、抗微生物、抗癌、降压、祛痰等多种生理活性。前茬种植茼蒿的地块，再种西瓜，西瓜长势良好，没有发生枯萎病，且西瓜产量和品质都有所提高。从茼蒿中分离出具有抑菌活性的单体，它可以开发成一种天然杀菌剂应用抑制西瓜枯萎病菌，具有良好广阔的应用前景。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明所要解决的技术问题在于提出一种茼蒿抑菌活性单体的制备方法，其能够提取高效的抑菌活性的单体，可以很好地抑制西瓜枯萎病菌，具有良好广阔的应用前景。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供了一种茼蒿抑菌活性单体的制备方法，包括以下步骤：

S1：茼蒿茎叶预处理：称取新鲜的茼蒿茎叶20Kg，自然晾干后，于45-55℃鼓风干燥机中干燥10-14h，精确称取1.7-2.3Kg干燥后的茼蒿，于中药材粉碎机中粉碎，过40目筛；

S2：浸提：加入48-52L的95％乙醇超声波辅助提取2-4次，每次1-3h，合并滤液减压浓缩，得到浸膏；

S3：大孔树脂柱层析：浸膏溶解于1.1-1.3L蒸馏水中，过滤，上清液上于D101大孔树脂柱中，依次用蒸馏水、10％甲醇、30％甲醇、50％甲醇、70％甲醇和90％甲醇梯度洗脱，每个梯度洗脱1.9-2.1L溶剂，流速2.5-3.5mL/min，分别回收每个梯度洗脱后的洗脱液，进行减压回收得到六个馏分，将西瓜枯萎病菌接种于含有不同馏分的PDA培养基中，置于28摄氏度的恒温培养箱培养4d，筛选出其中菌落直径最小对应的馏分A；

所述D101大孔树脂柱的直径为3.0-5.0cm，大孔树脂柱长度为23-27cm；