[发明专利]一种视网膜干细胞定向分化为视网膜细胞的诱导方法

说明书

本发明提供一种视网膜干细胞定向分化为视网膜细胞的诱导方法，包括：对视网膜干细胞进行分离、培养及鉴定；通过胎牛血清和TGF‑β₂对选取的传代培养的第六代视网膜干细胞进行诱导分化，对比观察血清组与TGF‑β₂组分化细胞的程度及数量的不同。利用本发明，能够解决现有的干细胞不适于临床应用中的直接移植的问题。

技术领域

本发明涉及干细胞培养及分化技术领域，更为具体地，涉及一种视网膜干细胞定向分化为视网膜细胞的诱导方法。

背景技术

干细胞(embryonic stem cells，ES细胞)的研究是最近几十年生命科学研究领域发展最快和最受重视的前沿生物技术之一。干细胞研究的科学价值在于其诱人的应用前景。任何涉及丧失正常细胞的疾病，都可以移植由干细胞分化而来的特异组织细胞来治疗。通过移植视网膜干细胞(Retina Stem Cell，RSC)使其整合入视网膜各层并诱导其增殖分化为目标细胞，补充缺失的视网膜神经元，重建视网膜功能，将给不可逆性致盲眼病患者带来希望。目前，哺乳动物视网膜干细胞的研究主要集中在干细胞的分离及定向分化方面，其中分化的研究工作未有明显进展，使用的方法及其效果存在较大差异，远没有形成一些公认的较成熟的方法。视网膜干细胞体外增殖的研究已经取得了一定进展，一些干细胞系已经建立，但视网膜干细胞移植的目的是要其在移植部位分化为成熟的视网膜细胞，替代已经损伤的视网膜细胞。因此，对视网膜干细胞分化的研究是极其重要的。目前，关于视网膜干细胞诱导分化的文献，在国内外文献中较少报道。通过查阅文献，了解 TGF-β具有控制细胞增殖和分化的作用。在视网膜组织中主要有TGF-β₁和TGF-β₂，又以TGF-β₂为主，可见TGF-β₂对视网膜的功能具有重要作用。

不可逆失明的主要原因包括年龄相关性黄斑变性(AMD)、色素性视网膜炎、青光眼和视网膜血管病，视网膜血管病引起视网膜中的 RPE、光感受器、视网膜神经节细胞(RGC)和支持细胞的损失。一种潜在的治疗方法是通过移植健康的视网膜细胞以替代损失的视网膜细胞来恢复视觉功能。在最近几十年里，尝试使用从人胎儿或成人视网膜组织分离的原代视网膜祖细胞获得了有限的成功，这是由于成体祖细胞的低扩张能力和分化潜力或获得充足的人胎儿视网膜祖细胞的困难，引发了伦理问题。人多能干细胞(hPSC)(包括人胚胎干细胞(hESC) 和诱导性多能干细胞(iPSC))代表了用于基于细胞的替代疗法的有前景的可再生供体来源。然而，hPSC自身并不适于临床应用中的直接移植，这是由于它们形成畸胎瘤的倾向和它们在体内用以期望的重编程细胞类型重建宿主组织方面的低效率。

为了解决上述问题，本发明提出了一种视网膜干细胞定向分化为视网膜细胞的诱导方法。

发明内容

鉴于上述问题，本发明的目的是提供一种视网膜干细胞定向分化为视网膜细胞的诱导方法，以解决现有的干细胞不适于临床应用中的直接移植的问题。

本发明提供一种视网膜干细胞定向分化为视网膜细胞的诱导方法，包括：对视网膜干细胞分离、传代培养及鉴定；

分别通过TGF-β₂和胎牛血清对视网膜干细胞诱导分化，并对诱导分化结果进行鉴定；

对比观察TGF-β₂与胎牛血清分化细胞的程度及数量的不同。

此外，优选的方案是，对视网膜干细胞分离、传代培养及鉴定包括：

对视网膜干细胞进行分离，获取到所述视网膜干细胞的原代细胞；

对所述视网膜干细胞的原代细胞进行传代培养；

对培养的视网膜干细胞进行鉴定。

此外，优选的方案是，在分别通过TGF-β₂和胎牛血清对视网膜干细胞诱导分化，并对诱导分化结果进行鉴定过程中，