[发明专利]一种小花万代兰种苗组织培养繁殖方法

权利要求书

1.一种小花万代兰种苗组织培养繁殖方法，其特征在于：包括下列步骤：

第一步：外植体消毒；

第二步：类原球茎诱导培养；

第三步：类原球茎增殖培养；

第四步：类原球茎分化培养；

第五步：生根壮苗培养；

第六步：出瓶移栽。

2.根据权利要求1所述的小花万代兰种苗组织培养繁殖方法，其特征在于：在采集外植体30天前，先用500-800倍体积的多菌灵浇灌小花万代兰植株，并喷施小花万代兰植株的叶片，一周之后再用质量分数为72%的农用链霉素可溶性粉剂的3000-4000倍体积的水溶液浇灌小花万代兰植株，并喷施小花万代兰植株的叶片，然后用解剖刀对所述小花万代兰植株的顶芽进行切取，获得长度为2~4厘米的顶芽为外植体。

3.根据权利要求2所述的小花万代兰种苗组织培养繁殖方法，其特征在于：先用干燥的棉花擦拭所述外植体，再用乙醇浸泡的棉花擦拭，然后将外植体切成小段，每段包含至少一个芽点，再用乙醇浸泡，然后用无菌水清洗，接下来用HgCl₂浸泡，然后用无菌水清洗，吹干水分后剥去苞叶，再用HgCl₂浸泡，吹干水分后得到吹干的嫩芽。

4.根据权利要求3所述的小花万代兰种苗组织培养繁殖方法，其特征在于：于无菌条件下，对所述吹干后的嫩芽进行切取，获得高度为1~2厘米的带节的茎段和顶芽，然后接种到类原球茎诱导培养基上，所述茎段节位和顶芽基部节位有腋芽产生，外植体基部切口膨大形成颗粒突起后，转移到新的类原球茎诱导培养基进行培养，获得类原球茎繁殖材料；培养条件为：温度为23~27℃，光照度为1500～2000lx，光照时长为11~13h/天；所述类原球茎诱导培养基的pH 值为5.4-5.6；每升所述类原球茎诱导培养基含有1～2g的花宝1号、1～2g的花宝2号、20～40mg的硫酸亚铁、20～40mg的乙二胺四乙酸二钠、0.5～2g的蛋白胨、50～100mL的椰子汁、80~120mg的肌醇、1.5~2.5mg的甘氨酸、0.05~0.2mg的盐酸硫胺素、0.4~0.8mg的盐酸吡哆醇、0.4~0.8mg的烟酸、5.0~8.0mg的 6-苄基嘌呤、0.2~2mg的萘乙酸、15～30g的蔗糖、6～7g的琼脂。

5.根据权利要求4所述的小花万代兰种苗组织培养繁殖方法，其特征在于：将所述类原球茎繁殖材料转接至增殖培养基进行培养，获得增殖的类原球茎繁殖材料；培养条件为：温度为23~27℃，光照度为1500～2000lx，光照时长为11~13h/天；所述增殖培养基的pH 值为5.4-5.6；每升所述增殖培养基含有1～2g的花宝1号、1～2g的花宝2号、20～40mg的硫酸亚铁、20～40mg的乙二胺四乙酸二钠、0.5～2g的蛋白胨、40～80g的土豆泥、80~120mg的肌醇、1.5~2.5mg的甘氨酸、0.05~0.2mg的盐酸硫胺素、0.4~0.8mg的盐酸吡哆醇、0.4~0.8mg的烟酸、2.0~5.0mg的6-苄基嘌呤、0.2~0.5mg的萘乙酸、15～30g的蔗糖、6～7g的琼脂。

6.根据权利要求5所述的小花万代兰种苗组织培养繁殖方法，其特征在于：将所述增殖的类原球茎繁殖材料转接至分化培养基进行培养，分化形成高度为3~5厘米的不定芽；培养条件为：温度25~29℃，光照度2000～3000lｘ，光照时长为11~13小时/天；每升所述分化培养基含有1～2g的花宝1号、1～2g的花宝2号、20～40mg的硫酸亚铁、20～40mg的乙二胺四乙酸二钠、0.5～2g的蛋白胨、40～80g的土豆泥、50～100mg的活性碳、80~120mg的肌醇、1.5~2.5mg的甘氨酸、0.05~0.2mg的盐酸硫胺素、0.4~0.8mg的盐酸吡哆醇、0.4~0.8mg的烟酸、3.0~6.0mg的6-苄基嘌呤、0.2~0.5mg的萘乙酸、15～30g的蔗糖、6～7g的琼脂；所述分化培养基的pH值为 5.4-5.6。