[发明专利]利用蓝藻蛋白RbrA直观检测目的蛋白表达纯化的方法

权利要求书

1.一种直观检测目的蛋白表达纯化的方法，构建目的蛋白基因与蓝藻rbrA基因或其同源基因的融合基因，并将含该融合基因的表达载体转入表达菌种中进行表达，通过观察表达菌液破碎后的上清液和/或其纯化组分的颜色来判断融合蛋白是否被成功表达和/或纯化，如果上清液和/或纯化组分偏紫红色，说明目的蛋白与蓝藻RbrA蛋白或其同源蛋白一起被表达和/或纯化。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在对表达的融合蛋白进行柱纯化的过程中，通过观察柱料是否变为紫红色来判断目的蛋白是否结合上柱料。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蓝藻rbrA基因是编码序列表中SEQ ID No：1所示氨基酸序列的DNA分子。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述蓝藻rbrA基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No：2所示。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蓝藻rbrA基因或其同源基因选自下列基因中的一种：鱼腥藻Anabaena sp.PCC 7120编号为alr1174的基因，鱼腥藻Anabaena variabilis ATCC 29413编号为Ava_4424的基因，项圈藻Nostoc sp.PCC 7524编号为Nos7524_5438的基因，单歧藻属Tolypothrix sp.PCC 7601编号为FDUTEX481_00449的基因，项圈藻Nostoc sp.PCC 7107编号为Nos7107_5204的基因；或者是与上述基因之一编码相同氨基酸序列的DNA分子。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述融合蛋白的N端或C端连接His标签。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在rbrA基因或其同源基因与目的蛋白基因之间插入凝血酶酶切位点的编码序列。

8.一种直观检测目的蛋白表达纯化的表达盒，包括启动子、蓝藻rbrA基因或其同源基因、多克隆位点和终止子，其中多克隆位点用于插入目的基因，插入的目的基因与蓝藻rbrA基因或其同源基因处于相同的阅读框。

9.如权利要求8所述的表达盒，其特征在于，所述表达盒还包括凝血酶酶切位点的编码序列，该凝血酶酶切位点的编码序列位于蓝藻rbrA基因或其同源基因与多克隆位点之间。

10.如权利要求8所述的表达盒，其特征在于，所述表达盒在蓝藻rbrA基因或其同源基因上游连接有His标签的编码序列。

11.如权利要求8所述的表达盒，其特征在于，所述表达盒依次包括：由T7启动子和lac操纵子组成的可诱导表达元件，带His标签编码序列的蓝藻rbrA基因或其同源基因，凝血酶酶切位点的编码序列，多克隆位点和T7终止子。

12.利用权利要求11所述的表达盒进行目的蛋白表达纯化的方法，包括：将目的蛋白X的基因x连入表达盒的多克隆位点中，形成rbrA-x融合蛋白基因；将所述表达盒构建在表达载体上，然后将表达载体转入表达菌株中诱导表达，通过观察表达菌液破碎后上清的颜色是否偏紫红来检测目的蛋白X是否表达；将偏紫红色的上清液用镍柱纯化6×His-RbrA-thrombin-X融合蛋白，若柱料为紫红色，表示蛋白X已经表达并与柱料结合；然后用凝血酶酶切，洗脱之后目的蛋白X存在于洗脱液中，而6×His-RbrA残留在柱料上，从而得到纯化的目的蛋白X。

13.含有权利要求8～11任一所述表达盒的载体或宿主细胞。