[发明专利]猪蓝耳病毒诱导仔猪体内免疫细胞氧化胁迫模型的构建方法

权利要求书

1.一种猪蓝耳病毒诱导仔猪体内免疫细胞氧化胁迫模型的构建方法，其特征在于：采用猪蓝耳病毒PRRSV-GXNN1396株通过滴鼻、肌肉注射两种途径联合感染仔猪，猪蓝耳病毒病毒滴度为4×10⁴TCID₅₀/0.1mL的PRRSV原液。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于：所述感染剂量为PRRSV原液4mL/头，感染时间为第1天。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)PRRSV实验性感染仔猪肺泡巨噬细胞方案的选择

选取30日龄，PRRSV/PCV-2抗体及抗原均为阴性的健康仔猪1头，饲养温度恒定在22±2℃，暂养5d使其充分适应环境，以减少应激，并让其自由采食及饮水，仔猪于实验开始前12h禁食，提前6h禁水；

健康仔猪放血致死后，取出完整的气管和肺脏，收集、富集、纯化肺泡巨噬细胞，加入10％RPMI 1640培养液制成5×10⁶单细胞悬液，加入细胞培养板中，放入37℃，5％CO₂培养箱中培养2h，进行分组实验，加入梯度稀释的PRRSV感染细胞后，在不同的时间点检测细胞存活率，进行数据分析，确定PRRSV感染方案；

(2)PRRSV感染健康仔猪氧化胁迫模型的建立

将12头PRRSV/PCV-2抗体及抗原均为阴性的健康仔猪随机分为2组，每组6头，根据步骤(1)确定的方案感染PRRSV，RPMI 1640作对照组；

其中，PRRSV攻毒组：感染PRRSV，4mL/头，分别在第3d、6d处理仔猪；空白对照组：给予RPMI 1640，4mL/头，分别在第3d、6d处理仔猪；

分离肺泡巨噬细胞，用于进行氧化应激相关指标的测定。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于：所述氧化应激相关指标包括肺泡巨噬细胞活性氧水平，GSH、NO含量和XOD、MPO、iNOS活性，以及COX-1、COX-2、IL-6、IL-8、IL-10、IL-1β、IFN-γ、MCP-1、TNF-α因子水平。