[发明专利]一种组织胶原修复匀浆CCFC的制备方法及用途

权利要求书

1.组织胶原修复匀浆CCFC的制备方法，其包括以下步骤：

(a)用含有抗凝剂的采血器具收集适量全血；

(b)将收集的全血置于离心管内，进行一次离心分层；

(c)将底部红细胞沉淀去除，收集沉淀以上部分，进行二次离心分层；

(d)弃上层血浆，取中间层细胞及上下0.5厘米处匀浆，转移至新的离心管内，充分混匀；

(e)于匀浆内添加一定剂量的人源化细胞因子或干细胞，混匀后，即得CCFC。

2.根据权利要求1的方法，其特征在于以下任一项或多项：

步骤(a)中所述抗凝剂是氯化锂、枸橼酸钠、乙二胺四乙酸及其复合物或组合物，其中优选氯化锂；

氯化锂的典型用量为60-100USP/Units用于5ml血液抗凝，其中优选用量为95USP/Units；

氯化锂以溶液或者冻干粉形式存在于冻存管内，其中优选冻干粉；

步骤(a)中所述全血是新鲜的外周血或脐带血；

步骤(a)中所述全血是来自于受试个体的外周血或者新生儿的脐带血。

3.根据权利要求1的方法，其特征在于以下任一项或多项：

步骤(a)中所述采血器具主要是采血管、离心管或者采血袋等。其采血管、离心管或者采血袋均为无菌包装。

4.根据权利要求1的方法，其特征在于以下任一项或多项：

步骤(b)中所述一次离心转速为2000～3000rpm，其中优选2500rpm；

步骤(b)中所述一次离心时间为8-15min，其中优选10min。

5.根据权利要求1的方法，其特征在于以下任一项或多项：

步骤(c)中所述二次离心转速为2500～3500rpm，其中优选3000rpm；

步骤(c)中所述二次离心时间为5-10min，其中优选8min。

6.根据权利要求1的方法，其特征在于以下任一项或多项：

步骤(c)和步骤(d)中所述离心后全血状态为三层分布，其三层分布分别是最上层为血浆层、中间层为白膜层(其中，白膜层富含血小板和白细胞)、最下层为红细胞层。

7.根据权利要求1的方法，其特征在于以下任一项或多项：

步骤(d)中所述血浆还包含预留适量体积(预留体积不低于200ul，其最适体积为1ml)血浆用于质量控制等。

步骤(d)中所述取中间层细胞及上下0.5厘米处匀浆，此处应尽量避免吸入下层红细胞。

8.根据权利要求1的方法，其特征在于以下任一项或多项：

步骤(e)中所述人源化细胞因子，主要包括白介素、肿瘤坏死因子、成纤维细胞促生长因子等(其中，白介素主要是IL-2，肿瘤坏死因子主要是TGF-β，成纤维细胞促生长因子主要是bFGF)，其种类包含一种或多种组合物；

步骤(e)中所述人源化细胞因子的有效浓度约为10-30ug/ml，其中IL-2优选浓度为12-16ug/ml、TGF-β优选浓度为15-20ug/ml、bFGF优选浓度为18-24ug/ml；

步骤(e)中所述人源化干细胞主要取自于受试个体自体脂肪组织、受试个体自体骨髓组织、新生儿脐带组织、新生儿脐带血等；

步骤(e)中所述人源化干细胞回注代次主要局限于不高于P8代，其优选于P3-P5代；

步骤(e)中所述人源化干细胞回注数量主要局限于不高于10⁵/次，其优选4～6x 10⁵/ml。