[发明专利]一种补体C3检测试剂盒的制备方法

权利要求书

1.一种补体C3检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)按照下列组分含量配制试剂R1：

试剂R1：

其溶剂为纯化水；

①按照上述试剂R1的组分含量，将Tris溶于纯化水中，搅拌均匀，待充分溶解，配制成R1缓冲液；

②按照上述试剂R1的组分含量，将聚乙二醇8000、EDTA-Na、叠氮钠溶于R1缓冲液中，搅拌均匀，再用1mol/L盐酸或氢氧化钠调pH至8.5，即制得试剂R1；

(2)按照下列组分含量配制试剂R2：

试剂R2：

其溶剂为纯化水；

①按照上述试剂R2的组分含量，将Tris溶于纯化水中，搅拌均匀，待充分溶解，配制成R2缓冲液；

②按照上述试剂R2的组分含量，将BSA、EDTA-Na、Tween-20、络蛋白、蔗糖、NaCl、叠氮钠溶于R2缓冲液中，搅拌均匀，得R2分散液；

③制备聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体：

a.将聚苯乙烯乳胶用PB缓冲液稀释到浓度为1％-5％，每毫升体积溶液中加入EDAC 1.6mg，室温反应2h，10000-20000rpm转速下离心30-40min，去上清，将沉淀悬浮于MES缓冲液中，超声分散；

b.再于10000-20000rpm转速下离心30-40min，弃上清，将沉淀悬浮于PB缓冲液中，使其中的聚苯乙烯乳胶颗粒最终浓度为3.0％，超声分散；接着，边搅拌边加入等体积的含抗人C3抗体的PB稀释液，混合搅拌，室温反应2h，其中的胶乳颗粒最终浓度为1.5％；

c.10000-20000rpm转速下离心30-40min，弃上清，沉淀悬浮PB缓冲液中，超声分散，加入BSA，4℃封闭过夜，离心去上清后，得最终所需的聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体；

④用R2分散液来溶解得到的聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体，使其中的胶乳颗粒终浓度为0.1-2.0％，超声分散，再用1mol/L盐酸或氢氧化钠调pH至7.4，最终制得试剂R2。

2.根据权利要求1所述的补体C3检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体的步骤a中，采用的聚苯乙烯乳胶微粒原料为粒径为100-200nm的聚苯乙烯乳胶微粒。

3.根据权利要求1所述的补体C3检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体的步骤a中，采用的PB缓冲液为0.1-0.15mol/L的PB缓冲液，采用的MES缓冲液为0.05-0.1mmol/L的MES缓冲液。

4.根据权利要求1所述的补体C3检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体的步骤b中，采用的PB缓冲液为0.1-0.15mol/L的PB缓冲液，采用的PB稀释液为0.02-0.05mol/L的PB缓冲液。

5.根据权利要求1所述的补体C3检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体的步骤b中，抗人C3抗体与聚苯乙烯乳胶微粒包被的质量比为(1-3)：10。

6.根据权利要求1所述的补体C3检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体的步骤c中，采用的PB缓冲液为0.02-0.05mol/L的PB缓冲液。

7.根据权利要求1所述的补体C3检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体的步骤c中，采用的BSA为0.5％-1％BSA。