[发明专利]一种补体C3检测试剂盒的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学检验技术领域，尤其涉及一种补体C3检测试剂盒的制备方法。

背景技术

补体C3是由α和β两条肽链通过二硫键连结组成，为β1球蛋白，分子量180kD，含糖量约占2.2％，是血清中含量最多的补体成分，约占总补体含量的1/3以上。在补体系统激活过程中，无论是经典途径还是旁路途径，均需C3活化后才能推进后续补体成分(C5-C9)的连锁反应。因此，它在两条激活途径中起关键作用。补体C3主要在肝实质细胞被合成分泌，少量由巨噬细胞和单核细胞合成。生理情况下，体液中或组织炎症部位存在的蛋白水解酶，可缓慢裂解C3，持续产生少量的C3b和C3转化酶(C3bB)，一般可被I因子、H因子迅速灭活，故并不激活补体系统，一旦C3被激活物质激活，C3b又可在B因子、D因子作用下合成新的C3bBb并进一步使C3激活，裂解、释放许多生物学活性片段，其结果可表现为增强机体的防御能力，亦可出现引起疾病的免疫病理作用。

C3的增多与减少基本与总补体活性相似，但更为敏感。补体C3在机体组织损伤和急性炎症时，常增高或为正常，如菌血症、肺炎、扁桃腺炎、结核、伤寒、麻疹、流脑等；肿瘤患者，尤以肝癌，血清C3含量升高更为显著，但胰腺癌晚期与隐性淋巴细胞白血病则呈降低趋势。补体动态变化在临床上越来越受到重视。抗原-抗体复合物引起的胃炎病人血清总补体和C3均明显下降。大多数全身性红斑狼疮患者血清补体的降低和病情恶化有关。活动性全身性红斑狼疮患者血清中C1、C4、C2和C3降低，病情缓解时血清补体水平恢复正常。传染病及组织损伤和急性炎症时，C2、C3、C4均增加，总补体活性正常或升高，但晚期则降低。肿瘤患者补体量升高，特别是肝癌，C3升高最为明显，具有诊断意义。胰腺癌晚期与隐性淋巴细胞白血病患者C3降低。肝脏疾病患者C3多为降低，肾移植病人C3的水平不稳定，C3在排异反应开始时升高，然后下降到正常以下。

目前，检测血清补体C3的含量方法主要是普通的免疫比浊法，对补体C3含量检测的试剂盒也多是基于此方法设计。免疫比浊法是抗原抗体结合动态测定方法，其基本原理是：当抗原与抗体在一定稀释系统中反应且比例合适时，形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促聚剂的作用下，自液相析出，形成微粒，使反应液出现浊度；当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加；通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算出检样中抗原的含量。然而，该方法却也存在一些弊端：灵敏度低、线性范围窄，重复性差且不稳定。

乳胶颗粒增强比浊法(PETIA)是近年来出现的一种较稳定、准确的体液蛋白均相免疫比浊法。PETIA法大体分为两种：一种是散射比浊法；一种是透射比浊法；这两种方法的基本原理相似，都是以高分子胶乳微球为载体的表面交联相应抗体，当交联有抗体的微球与抗原结合后，短时间内可迅速聚集，改变反应液的散光性能或透光性能，且反应液散光性能或透光性能的改变与被测抗原的浓度相关，在一定范围内可以反映被测抗原的量。

PETIA法采用的乳胶颗粒多为惰性微球、羧基微球及氨基微球；微球表面的羧基或氨基与抗体的氨基端共价结合，形成的桥联化学臂降低了位阻效应，不仅提高了抗体的结合率，且为抗体提供合适的三维空间立体结构，有效地保护抗体与抗原结合的活性区域；微球粒子直径一般在20nm-4um，提高了检测灵敏度。微球的推出可在一定程度上解决了临床检测的线性范围窄、干扰因素多、实验稳定性差等问题。

因此，目前急需一种基于乳胶颗粒增强比浊法的补体C3检测试剂盒的制备方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种检测速度快、灵敏度高、线性范围宽、重复性好且稳定的补体C3检测试剂盒的制备方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：一种补体C3检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

(1)按照下列组分含量配制试剂R1：

试剂R1：

其溶剂为纯化水；

①按照上述试剂R1的组分含量，将Tris溶于纯化水中，搅拌均匀，待充分溶解，配制成R1缓冲液；

②按照上述试剂R1的组分含量，将聚乙二醇8000、EDTA-Na、叠氮钠溶于R1缓冲液中，搅拌均匀，再用1mol/L盐酸或氢氧化钠调pH至8.5，即制得试剂R1；

(2)按照下列组分含量配制试剂R2：

试剂R2：

其溶剂为纯化水；