[发明专利]一种以自身脐带间充质干细胞作为基质细胞扩增人类脐带血造血干细胞的方法

权利要求书

1.一种脐带造血干细胞的分离培养方法，其特征在于，包括：

以脐带间充质干细胞为滋养细胞与脐血单个核细胞共培养，14～21天后收集非粘附细胞，即为脐血造血干细胞；

所述脐带间充质干细胞与脐血单个核细胞的数量比为10:1～1:1；

所述共培养的细胞培养液，由基础培养基、干细胞生长因子、flt3配体、促血小板生成素、IL-6、IL-3、多效生长因子和亚叶酸钙组成；所述共培养的细胞培养液中，各组分的浓度为：

2.根据权利要求1所述的分离培养方法，其特征在于，所述脐血单个核细胞的培养密度为5×10⁴～1×10⁶cell/ml。

3.根据权利要求1所述的分离培养方法，其特征在于，所述脐带间充质干细胞的制备方法为：

用胶原酶消化脐带组织后，离心收集细胞沉淀，培养液洗涤细胞沉淀后，以培养液进行培养，每2～3天换一次培养液，贴壁细胞即为脐带间充质干细胞；胰酶消化重悬后传代；所述培养液由体积比为4:1的MesenCult^TM-ACF培养液和MesenCult^TM-ACF 5×Supplement培养液组成。

4.根据权利要求1所述的分离培养方法，其特征在于，所述脐血单个核细胞的分离方法为：

将以3倍体积PBS缓冲液稀释的脐血，铺于Ficoll-Hypaque分层液上，稀释的脐血与Ficoll-Hypaque分层液的体积比为4:3；

然后800g，离心30min，收集界面层细胞；

界面层细胞用PBS洗三次后收集沉淀，获得脐血单个核细胞；

所述PBS缓冲液中含质量分数为0.1％的BSA，质量分数为0.6％的柠檬酸，pH 7.4。

5.一种细胞培养液，其特征在于，由基础培养基、干细胞生长因子、flt3配体、促血小板生成素、IL-6、IL-3、多效生长因子和亚叶酸钙组成；各组分的浓度为：

6.根据权利要求5所述的细胞培养液，其特征在于，所述基础培养基为无血清干细胞培养基。

7.权利要求5～6任一项所述的细胞培养液在造血干细胞分离培养中的应用。