[发明专利]稳定的天冬氨酸氨基转移酶检测试剂盒及其制备使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学检验技术领域，尤其涉及一种稳定的天冬氨酸氨基转移酶检测试剂盒及其制备使用方法。

背景技术

随着社会经济的发展和人们生活水平的提高，人类对健康越来越重视。肝病是一种常见的危害性极大的疾病，对肝病的及时诊断及治疗对于疾病的预防及诊疗具有重要作用。在肝功能检查中，谷氨酸氨基转移酶是反映肝细胞受损的指标，而天冬氨酸氨基转移酶则是反映肝细胞坏死的指标，对二者的精准检测可准确反映肝的状态。

目前，对天冬氨酸氨基转移酶的检测多采用相应试剂盒结合全自动生化分析仪进行；然而，现有试剂盒的稳定性不好，长期储存和使用过程中酶活性容易降低，导致测试结果不准确。

因此，目前急需一种稳定性好的天冬氨酸氨基转移酶检测试剂盒。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种稳定性好的天冬氨酸氨基转移酶检测试剂盒及其制备使用方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：一种稳定的天冬氨酸氨基转移酶检测试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：

试剂R1：

试剂R2：

作为本发明的优选方式之一，所述试剂R1的pH为8.0。

作为本发明的优选方式之一，所述试剂R2的pH为7.8。

一种稳定的天冬氨酸氨基转移酶检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

(1)配制试剂R1

a.按照试剂R1的组分含量，将三羟甲基氨基甲烷溶于纯化水中，搅拌均匀，待充分溶解，配制成R1缓冲液；

b.按照试剂R1的组分含量，将三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、乙二胺四乙酸二钠盐、迭氮钠、天冬氨酸溶于R1缓冲液中，搅拌均匀，待所有原料充分溶解，调节pH；

c.按照试剂R1的组分含量，将NADH、G6PD溶于上述步骤所得的混合溶液中，搅拌均匀，即制得试剂R1；

(2)配制试剂R2

a.按照试剂R2的组分含量，将三羟甲基氨基甲烷溶于纯化水中，搅拌均匀，待充分溶解，配制成R2缓冲液；

b.按照试剂R2的组分含量，将三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、α-酮戊二酸溶于R2缓冲液中，搅拌均匀，待所有原料充分溶解，调节pH；

c.按照试剂R2的组分含量，将苹果酸脱氢酶溶于上述步骤所得的混合溶液中，搅拌均匀，即制得试剂R2。

一种稳定的天冬氨酸氨基转移酶检测试剂盒的使用方法，包括如下步骤：

(1)将待测样品与试剂R1混合均匀，37℃孵育1min；

(2)用全自动生化分析仪测定步骤(1)反应后的吸光度A1，

(3)再与试剂R2混合均匀，37℃孵育2min；

(4)用全自动生化分析仪测定步骤(3)反应后的吸光度A2；

(5)根据A1和A2的吸光度变化值计算出样本中的天冬氨酸氨基转移酶的浓度。

作为本发明的优选方式之一，所述步骤(1)中试剂R1和步骤(3)中试剂R2的体积比为2:1。

作为本发明的优选方式之一，所述步骤(2)和步骤(4)中，在主波长340nm、副波长405nm处测定吸光度A1和A2。

作为本发明的优选方式之一，所述待测样品与试剂R1、试剂R2构成的总试剂的体积比为1：20。

作为本发明的优选方式之一，所述步骤(5)中A1和A2的吸光度变化值为ΔA，即A1数值减去A2数值后的差值。

试剂盒中各成分功效：

三羟甲基氨基甲烷、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐：配制成缓冲液，主要是起到缓冲作用，保证反应过程中反应体系环境的稳定，保证检测结果不会受到波动和影响；

迭氮钠：作为防腐剂，主要是防止试剂在储藏和运输中腐败变质；

NADH：在酶促反应中生成不同形式的辅酶，引起吸光度变化；

天冬氨酸：作为反应底物，用于生成L-谷氨酸；

G6PD：保护试剂中酶的活性，使之能够保持高效长期储存和使用；

α-酮戊二酸：反应底物，用于生成草酰乙酸；

苹果酸脱氢酶：用于催化草酰乙酸反应生成NAD和苹果酸。

本发明相比现有技术的优点在于：

(1)制备简单、操作方便、成本低，利于推广应用；

(2)检测速度快，仅需3分钟，效率高；