[发明专利]一种应拉木胶质层显微切片的染色方法

权利要求书

1.一种应拉木胶质层显微切片的染色方法，包括以下步骤：

（1）将阔叶树材倾斜或弯曲的树干或树枝锯成圆盘，确定应拉木区域；

（2）在所述步骤（1）确定后的应拉木区域选取木样，经水煮排气、软化后，切取横切面切片置于蒸馏水中洗涤；水煮排气的时间为3-5h；软化采用酒精甘油体积比1:1混合液浸泡法，软化时间为24-72h；切取横切面切片采用滑走式切片机或瑞士便捷切片机，所述切片厚度为10-20um；

（3）将步骤（2）洗涤后的切片立即用番红-星蓝乙酸染液进行双重染色，番红-星蓝乙酸染液采用的番红染液质量浓度为1-2%，番红染液的溶剂为体积浓度50%的乙醇溶液，采用的星蓝染液质量浓度为1%，星蓝染液的溶剂为体积浓度3%的乙酸溶液；染色过程中用体积浓度为30-100%的梯度乙醇溶液进行脱水，具体的染色、脱水步骤为：3%乙酸溶液5min，星蓝染液5min，蒸馏水1min，30%乙醇溶液1min，50%乙醇溶液1min，番红染液24h，50%乙醇溶液5min，70%乙醇溶液5min，85%乙醇溶液5min，95%乙醇溶液5min，无水乙醇5min，无水乙醇5min，无水乙醇5min；即得到脱水染色后的应拉木胶质层显微切片。

2.根据权利要求1所述的染色方法，其特征在于，所述步骤（1）中，圆盘的厚度为20-30mm。

3.根据权利要求1所述的染色方法，其特征在于，所述步骤（1）中，确定应拉木区域采用观察法或氯锌碘溶液法。

4.根据权利要求3所述的染色方法，其特征在于，所述观察法为将所述圆盘的端面砂光后进行肉眼或用10倍放大镜进行观察，在年轮偏宽和起毛一侧区域即为所述应拉木区域。

5.根据权利要求3所述的染色方法，其特征在于，所述氯锌碘溶液法为将所述圆盘的端面砂光后用氯锌碘溶液进行涂刷观察并显色反应，呈现深褐色的区域即为所述应拉木区域，呈现浅黄色的区域则为正常木区域。

6.根据权利要求5所述的染色方法，其特征在于，所述氯锌碘溶液的制备方法包括如下步骤：将75-85质量份的氯化锌和34-45质量份的水配制成I液，将8-9质量份的碘化钾、0.3-0.5质量份的碘和15-25质量份的水配制成II液，然后将所述I液和II液混合即得到所述的氯锌碘溶液。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的染色方法，其特征在于，将步骤（3）脱水染色后得到的切片放置于载玻片上，滴加加拿大树胶或中性快干胶，盖上盖玻片，制成永久切片，并于光学显微镜下观察。