[发明专利]一种应拉木胶质层显微切片的染色方法

说明书

本发明公开了一种应拉木胶质层显微切片的染色方法，包括以下步骤：(1)将阔叶树材倾斜或弯曲的树干或树枝锯成圆盘，确定应拉木区域；(2)在所述步骤(1)确定后的应拉木区域选取木样，经水煮排气、软化后，切取横切面切片置于蒸馏水中洗涤；(3)将步骤(2)洗涤后的切片立即用番红‑星蓝乙醇染液或番红‑星蓝乙酸染液双重染色进行，染色过程中用梯度乙醇溶液进行脱水，得到脱水染色后的应拉木胶质层显微切片。该染色方法使用番红‑星蓝染液对应拉木进行染色，可清晰地将应拉木胶质层与相邻壁层区分开来，便于观察胶质层的微观结构，更有利于对图像按照饱和度和灰值进行处理和分析，为研究应拉木提供更多可行性。

技术领域

本发明属于应拉木研究领域，尤其涉及一种应拉木胶质层显微切片的染色方法。

背景技术

由于受到风力、雨雪、斜坡等环境因素的影响，树木原本笔直的生长形态常常发生改变，产生倾斜生长。为了适应这种改变，阔叶材形成层往往分化应拉木以使树干或树枝保持其最佳的姿态。由于应拉木形成时产生的高拉伸应力，木材常产生开裂、翘曲等缺陷，对其加工和高效利用带来极大的不便。应拉木已成为阔叶材中一种较为普遍的构造，也成为当前的研究热点。

应拉木的解剖结构明显不同于正常木材，其纤维细胞壁除已木质化的三壁层外，次生壁内侧往往还具凝胶状的胶质层。胶质层外形类似于凝胶类物质，且高度折光，若用传统的单一染液染色方法，于光学显微镜下观察时，难与相邻壁层区别开，不能清晰的观察到胶质层的解剖特征。目前，国内外已有使用番红-固绿对染方法对应拉木切片进行染色的报道；番红可将具有木质素成分的细胞壁染成红色，而固绿又称快绿溶液，为酸性染料，能将细胞质、纤维素细胞壁染成鲜艳绿色，着色很快，还可将不具木素和具有木素的细胞壁都染成绿色，因此，具有木质素成分的细胞壁呈现出红色并伴随有不同程度的绿色，胶质层不含木质素，基本为纤维素细胞壁层，从而呈现出绿色。但在实际操作过程中，由于固绿均可对胶质层和相邻壁层着色，且着色很快，具体着色时间不好把握，且针对不同样品其着色时间不一，因此在实际操作中需要进行多次预实验进行确定，若固绿染色时间控制不当，胶质层与相邻壁层均呈现绿色，难以得到理想的观察效果。

胶质层作为应拉木的特有的细胞壁层，与应拉木异常的材性有直接关系。因此，研究胶质层的微观结构对探索应拉木高生长应力的产生，解决应拉木加工利用出现的问题具有重要理论意义，但目前，用于应拉木胶质层显微观察染色技术，染色效果不够理想，不能直观的将胶质层和其他壁层区分开，而星蓝染液用于应拉木染色的方法目前仍未被提及。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，克服以上背景技术中提到的不足和缺陷，提供一种能较好地将胶质层与其他壁层区分，获得理想的染色效果的应拉木胶质层显微切片的染色方法。

为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为提供一种应拉木胶质层显微切片的染色方法，包括以下步骤：

(1)将阔叶树材倾斜或弯曲的树干或树枝锯成圆盘，确定应拉木区域；

(2)在所述步骤(1)确定后的应拉木区域选取木样，经水煮排气、软化后，切取横切面切片置于蒸馏水中洗涤；

(3)将步骤(2)洗涤后的切片立即用梯度乙醇溶液脱水、番红-星蓝乙醇染液或番红-星蓝乙酸染液双重染色，得到脱水染色后的应拉木胶质层显微切片。