[发明专利]一种胚胎体外培养方法

权利要求书

1.一种胚胎体外培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）在胚胎培养前将胚胎培养液放入培养皿中，放入5% CO₂、5%O₂和平衡N₂中；所述胚胎培养液的主要组成成分为KSOMaa和BSA，所述培养皿为4孔培养皿，每孔胚胎培养液有300~500μl；

2）将受精卵收集好后，放入含600μl的浓度为1.0 mg/ml透明质酸酶中，沉淀30s，吸取上清液体至100μl，震荡器上震荡5min；加入1mlSOF-HEPES到离心管中，将所有液体移至100mm平皿中，将胚胎清洗3次后，放入上述培养皿中，培养第3天加入5%血清，第7天判断囊胚形成率；每孔放50个胚胎，培养期间不覆盖矿物油；所述胚胎为牛胚胎；

胚胎清洗方法为：分别用移液枪吸取SOF-HEPES液体100~200μl，做成液滴1和液滴2，用移液枪吸取预先在二氧化碳培养箱中平衡处理2h以上的胚胎培养液100~200μl，做成液滴3，用拣卵针在体式显微镜下拣取含有SOF-HEPES的混合液中的受精卵至液滴1，再用拣卵针将受精卵从液滴1中拣取至液滴2，再从液滴2中拣取至液滴3，共完成3次清洗；培养期间不更换培养液。