[发明专利]一种测定尿半乳糖的试剂盒及其制备使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学及生物化学技术领域，尤其涉及一种适用于全自动生化分析的测定尿半乳糖的试剂盒及其制备使用方法。

背景技术

乳糖不耐受是由于小肠黏膜表面缺乏乳糖酶导致的乳糖消化和吸收障碍，并伴有腹胀、腹泻、腹痛等一系列临床症状。根据发生的原因，可将乳糖不耐受分为：先天性乳糖酶缺乏、成人型乳糖酶缺乏和继发性乳糖酶缺乏。其中成人型乳糖酶缺乏是乳糖不耐受的主要类型，其发生可能在于饮食习惯造成乳糖酶基因的表达随时间的延长而逐渐关闭，表现为随年龄的增长，乳糖酶活性逐渐下降，直至消失。

乳糖不耐受症的实验室检测方法有很多种，目前常用的有氢气呼气试验、大便常规化验、还原糖测定以及尿半乳糖试验。其中，尿半乳糖试验通过测定尿液中的半乳糖浓度间接地反映乳糖的消化吸收状况，判断受试者的乳糖耐受。以尿半乳糖水平为指标，人体最适宜的浓度为41-116μmol/24h。

目前而言，测定尿半乳糖主要采用传统的金标试纸条法进行。此方法操作较为复杂，且人为因素对实验结果影响较大，无法适用于全自动生化分析仪，需手工操作，测试缓慢，操作人员的熟练程度对结果影响较大，无法大规模的开展和推广。

因此，目前急需一种检测速度快、效率高，适用于全自动生化分析仪的测定尿半乳糖的试剂盒及其制备使用方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种检测速度快、效率高，适用于全自动生化分析仪的测定尿半乳糖的试剂盒及其制备使用方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：一种测定尿半乳糖的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：

试剂R1：

试剂R2：

作为本发明的优选方式之一，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：

试剂R1：

试剂R2：

作为本发明的优选方式之一，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：

试剂R1：

试剂R2：

一种测定尿半乳糖的试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

(1)配制试剂R1

a.按照试剂R1的组分含量，将KH₂PO₄溶于纯化水中，搅拌均匀后，配制成R1缓冲液；

b.按照试剂R1的组分含量，将BSA缓慢的溶于制得的R1缓冲液中，搅拌均匀后，再将DETA.2Na和对羟基苯甲酸钠溶于其中，即制得试剂R1；

(2)配制试剂R2

a.按照试剂R2的组分含量，将MOPSO和MOPSO.Na溶于纯化水中，搅拌均匀后，配制成R2缓冲液；

b.按照试剂R2的组分含量，将BSA缓慢的溶于制得的R2缓冲液中，搅拌均匀后，再将POD、4-ATP、GAD溶于其中，混合液搅拌均匀，即制得试剂R2。

一种测定尿半乳糖的试剂盒的使用方法，包括如下步骤：

(1)将待测样品与试剂R1混合，37℃孵育5min；

(2)再与试剂R2混合，使其充分反应；

(3)用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；

(4)根据吸光度变化值计算出样本中的尿半乳糖的浓度。

作为本发明的优选方式之一，所述步骤(1)和步骤(2)中，试剂R1和试剂R2按照体积比4:1混合。

作为本发明的优选方式之一，所述步骤(3)中，在主波长546nm、副波长660nm处测定吸光度A1，30s后测定吸光度A2。

作为本发明的优选方式之一，所述步骤(4)中，吸光度变化值为A1和A2的变化值，即ΔA。

检测原理：酸性条件下，尿液中的半乳糖经过半乳糖糖氧化酶(GAD)水解生成的产物经过氧化物酶(POD)、4-氨基安替比林(4-ATP)与对羟基苯甲酸钠显色，生产醌色素，通过测定该色素的增加，可求出尿半乳糖的浓度。

式中：ΔA_T以空白管吸光度作对照的样品管吸光度值

ΔA_S以空白管吸光度作对照的校准管吸光度值

C_S校准液中UGA的浓度。

本发明相比现有技术的优点在于：