[发明专利]一种快速繁殖鼓槌石斛组培苗的方法

权利要求书

1.一种快速繁殖鼓槌石斛组培苗的方法，其特征在于：该方法包括如下具体操作步骤：

(1)外植体的选择与消毒：以鼓槌石斛成熟蒴果为外植体取材对象，先将蒴果清洗干净，并剔除宿存花被、果柄；然后在超净工作台上将外植体放入灭菌后的无菌容器中，先用75％的酒精浸泡60s，随后转入0.1％HgCl₂溶液中浸泡消毒8～10min，再用装有已灭菌无菌水的超声波清洗器震荡清洗8～10min，取出备用；

(2)种子萌发：取经步骤(1)处理过的蒴果，将果荚平切打开果皮，露出种子，夹取种子并均匀撒播于种子萌发培养基表面进行培养；种子播种培养5～7d，开始由黄转绿，接种10～15d萌发成原球茎，随后原球茎逐渐长大，接种30～35d分化出芽，获得小芽团，小芽团的芽大小0.5～0.8cm；

(3)壮苗培养：将步骤(2)获得的小芽团接种于壮苗培养基中培养，培养30～40d即可获得株高2.0～3.0cm、根长0.2～0.5cm、根数1～2条的健壮小苗；

(4)生根培养：将步骤(3)获得的健壮小苗接种于生根培养基中培养，培养55～60d即获得株高6.0～7.0cm、根长3.0～4.0cm、根数5～7条的完整植株即种苗；

(5)试管苗移栽：移栽前，将步骤(4)获得的苗进行炼苗至适应栽培环境，炼苗完成后用自来水洗苗，洗净苗根部粘连的培养基，之后将苗置于浓度为0.8～1.0g/L的多菌灵溶液中浸泡消毒3～5min，取出晾干后种植于发酵过的基质中，且基质在种植前均匀铺在温室苗床上，最后进行常规栽培管理即可；

其中，种子萌发培养基的组分为：Ca(NO₃)₂ 1.0g/L、(NH₄)₂SO₄ 0.8g/L、KH₂PO₄ 0.25g/L、MgSO₄·7H₂O 0.5g/L、H₃BO₃ 6.2mg/L、MnSO₄·H₂O 8.5mg/L、ZnSO₄·7H₂O 2.88mg/L、CuSO₄·5H₂O 0.005mg/L、FeSO₄·7H₂O 27.8mg/L、Na₂·EDTA 37.3mg/L、TDZ 0.3～0.5mg/L、NAA0.1～0.2mg/L、活性炭0.5～0.8g/L、香蕉粉2.5～3.0g/L、白糖30～35g/L、凝固剂4.5～5.0g/L；

壮苗培养基的组分为：花宝1号1.5～2.0g/L、KNO₃ 1.0g/L、NH₄NO₃ 0.8g/L、KH₂PO₄0.1g/L、MgSO₄·7H₂O 0.2g/L、CaCl₂·2H₂O 0.4g/L、H₃BO₃ 6.2mg/L、MnSO₄·H₂O 8.5mg/L、ZnSO₄·7H₂O 2.88mg/L、CuSO₄·5H₂O 0.005mg/L、FeSO₄·7H₂O 27.8mg/L、Na₂·EDTA37.3mg/L、VB₁ 5.0～8.0mg/L、VB₆ 1.0mg/L、肌醇100～150mg/L、白糖30～35g/L、凝固剂6.0～6.6g/L；

生根培养基的组分为：花宝1号1.2～1.5g/L、KNO₃ 0.8～1.0g/L、NH₄NO₃0.5～0.8g/L、KH₂PO₄ 0.1～0.15g/L、MgSO₄·7H₂O 0.15～0.2g/L、CaCl₂·2H₂O 0.2～0.4g/L、H₃BO₃6.2mg/L、MnSO₄·H₂O 8.5mg/L、ZnSO₄·7H₂O 2.88mg/L、CuSO₄·5H₂O 0.005mg/L、FeSO₄·7H₂O 27.8mg/L、Na₂·EDTA 37.3mg/L、VB₁ 1.0～2.0mg/L、VB₆ 3.0～5.0mg/L、肌醇100～150mg/L、白糖20～25g/L、凝固剂6.3～7.0g/L、吲哚丁酸0.3～0.5mg/L、活性炭1.0～1.5g/L、及香蕉粉3.0～4.0g/L。