[发明专利]一种快速繁殖鼓槌石斛组培苗的方法

说明书

本发明提供一种快速繁殖鼓槌石斛组培苗的方法，是以鼓槌石斛成熟蒴果为外植体取材对象，设计各培养阶段专用培养基配方，通过种子‑原球茎‑芽达到快速繁殖目的，包括以下步骤：外植体的选择和消毒、种子萌发培养、壮苗培养、生根培养及试管苗移栽。采用本发明方法仅需115d至135d就能获得鼓槌石斛种苗；本发明种子萌发与芽分化同步进行，简化了培养环节、降低了培养成本，且种子萌发率高，成苗时间短，即繁殖效率高，进而提高了整个种苗培养的效率；另外，本发明培养的试管苗健壮、根系发达，且通过驯化炼苗，其环境适应能力较强，从而提高了种苗移栽成活率，从而实现鼓槌石斛种苗快速繁育的目的。

【技术领域】

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种快速繁殖鼓槌石斛组培苗的方法。

【背景技术】

鼓槌石斛(Dendrobium chrysotoxum Lindl.)为兰科石斛属多年生植物，别名金弓石斛，兼具观赏、药用价值，全株可食；据《中国药典》记载：其味淡、性微寒，有滋阴养胃，清热解毒的功效，含有鼓槌菲、毛兰素等抗肿瘤活性成分，是脉络宁、通塞脉片、石斛液光丸等著名中成药的主要原料之一，在临床上多用于治疗慢性咽喉炎、眼科疾病、血栓闭塞性疾病，效果十分明显；同时，鼓槌石斛也是一种观赏性极佳的兰科植物，其花总状花序，金黄色，具清香，艳丽多姿，其茎呈纺锤形，奇特，其可作切花与盆栽观赏。

近年来，人们过度采挖，加上自然条件下种子萌发率低，导致鼓槌石斛的野生资源濒临枯竭；目前，鼓槌石斛种苗生产主要靠分株繁殖，繁殖速度慢，难以满足市场需求。因利用植物组织培养技术可以实现鼓槌石斛种苗快速繁殖，尤其鼓槌石斛果荚种子量大，有成千上万粒种子，种子的成功萌发与快速成苗问题，近年愈来愈受到从业人员的重视。

现有虽然出现一些关于鼓槌石斛组培快速繁殖的报道，但在规模化生产时，往往存在着种胚萌发率低(75％以下)、种苗繁殖周期长(8个月以上)、移栽成活率低(85％以下)等问题，这对鼓槌石斛优质种苗的获得极为不利。为了解决这些鼓槌石斛种子组培快繁中存在的问题，申请号为CN201410674752.6、名称为“一种鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法”的中国专利中，公开了以鼓槌石斛种子为材料，采用培养基进行种子萌发、分化继代培养及生根培养并获得种苗；其虽然建立了鼓槌石斛的组织培养繁殖技术，但其萌发率、成苗率、繁殖效率与移栽成活率并不理想；另外，申请号为CN201410392173.2、名称为“鼓槌石斛种苗商品化生产方法”的中国专利中，提出了以鼓槌石斛果荚为材料，采用改良培养基建立了鼓槌石斛无菌快繁体系，其虽然具有较为理想的种子萌发率(98％以上)、生长周期(155d)及移栽成活率(95％以上)，但却存在着操作过程相对较为繁复的缺陷。

由鉴于此，研究或优化，以期得到一种操作过程相对便捷、萌发率高、培养效率与移栽成活率均较为理想的鼓槌石斛种苗的组织培养快速繁殖方法，是从业人员所迫切希望地。

【发明内容】

本发明所要解决的技术问题在于提供一种快速繁殖鼓槌石斛组培苗的方法。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：一种快速繁殖鼓槌石斛组培苗的方法，该方法包括如下具体操作步骤：

(1)外植体的选择与消毒：以鼓槌石斛成熟蒴果为外植体取材对象，先将蒴果清洗干净，并剔除宿存花被、果柄；然后在超净工作台上将外植体放入灭菌后的无菌容器中，先用75％的酒精浸泡60s，随后转入0.1％HgCl₂溶液中浸泡消毒8～10min，再用装有已灭菌无菌水的超声波清洗器震荡清洗8～10min，取出备用；

(2)种子萌发：取经步骤(1)处理过的蒴果，将果荚平切打开果皮，露出种子，夹取种子并均匀撒播于种子萌发培养基表面进行培养；种子播种培养5～7d，开始由黄转绿，接种10～15d萌发成原球茎，随后原球茎逐渐长大，接种30～35d分化出芽，获得小芽团，小芽团的芽大小0.5～0.8cm；