[发明专利]稳定的蛋白质

权利要求书

1.一种融合蛋白，其从N端至C端包含：

a)家族B的G蛋白偶联受体的第一部分，其包含G蛋白偶联受体的跨膜螺旋TM1、TM2和TM3；

b)稳定的蛋白结构域；以及

c)G蛋白偶联受体的第二部分，其包含G蛋白偶联受体的TM4、TM5、TM6和TM7。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述G蛋白偶联受体是家族B的G蛋白偶联受体；

优选地，所述家族B的G蛋白偶联受体选自：类胰高血糖素肽1受体、类胰高血糖素肽2受体、降钙素受体、糊精/CGRP受体AMY₁α、糊精受体AMY₂α、糊精/CGRP受体AMY₃α、CGRP/肾上腺髓质素受体CGRP₁α、肾上腺髓质素/CGRP受体AM₁α、肾上腺髓质素/CGRP受体AM₂α、促肾上腺皮质素释放因子受体CRF₁、尿皮质素受体CRF₂、生长激素释放激素受体、抑胃多肽受体、胰高血糖素受体、分泌素受体、TIP-39受体PTH2、甲状旁腺激素受体PTH1、VIP/PACAP受体VPAC₁、PACAP受体PAC₂以及VIP/PACAP受体VPAC₂中的任一项。

3.根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其中所述G蛋白偶联受体是相对其亲代G蛋白偶联受体具有增加的构象稳定性的突变体G蛋白偶联受体。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的融合蛋白，其中所述稳定的蛋白结构域插入至G蛋白偶联受体的细胞内环2区，其中所述的环连接G蛋白偶联受体的第一和第二部分。

5.根据权利要求4所述的融合蛋白，其中根据图6所示人GLP1R的编号，在与氨基酸Phe 257和Ser 261相对应的氨基酸残基之间的位置上，将稳定的蛋白结构域插入至所述G蛋白偶联受体的细胞内环2区。

6.根据权利要求5所述的融合蛋白，其中根据图6所示人GLP1R的编号，在与氨基酸Phe 257相对应的氨基酸之后并在与氨基酸Ser 261或Phe 260或Val 259相对应的氨基酸之前，将稳定的蛋白结构域插入至所述G蛋白偶联受体的细胞内环2区。

7.根据权利要求5所述的融合蛋白，其中根据图6所示人GLP1R的编号，在与氨基酸Ser 258相对应的氨基酸之后并在与氨基酸Ser 261或Phe 260或Val 259相对应的氨基酸之前，将稳定的蛋白结构域插入至所述G蛋白偶联受体的细胞内环2区。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的融合蛋白，其中稳定的蛋白结构域选自溶菌酶、细胞色素b562、黄素氧化还原蛋白、β-内酰胺酶和70kDa热休克三磷酸腺苷酶结构域。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的融合蛋白，其进一步包含可检测的部分；

优选地，所述可检测的部分选自荧光标记、放射性标记或者酶标记中的任一项。

10.根据权利要求9所述的融合蛋白，其中所述可检测的部分是EGFP。

11.一种多核苷酸，其编码权利要求1至10中任一项所述的融合蛋白。

12.一种宿主细胞，其包含权利要求11所述的多核苷酸。

13.一种晶体，其包含权利要求1至10中任一项所述的融合蛋白。

14.根据权利要求1至10中任一项所述的融合蛋白，其处于溶解的形式或者其基本不含其它蛋白或者其固定至固相载体。

15.权利要求1至10中任一项所述的融合蛋白在用于结晶或用于药物发现或作为生物传感器中的用途；

优选地，所述药物发现是指配体结合筛选或分析开发。

16.一种使权利要求1至10中任一项所述的融合蛋白结晶的方法，所述方法包括提供权利要求1至10中任一项所述的融合蛋白，并使之结晶以获得晶体。

17.根据权利要求16所述的方法，其中通过培养权利要求12所述的宿主细胞以表达所述融合蛋白并分离所述蛋白来提供所述融合蛋白。

18.根据权利要求16或17所述的方法，其中使用脂立方相结晶学进行结晶。