[发明专利]激素诱导锌指状蛋白多肽及其制备方法和在制药中的应用

说明书

本发明属生物技术领域，涉及激素诱导锌指状蛋白多肽及其制备方法和药用用途，尤其是化学合成的激素诱导锌指状蛋白多肽在制备抑制炎症反应药物中的用途。本发明通过化学合成的方式合成由54个氨基酸组成的激素诱导锌指状蛋白多肽，该蛋白多肽水溶性好，动物实验玻璃体腔干预后能显著抑制内毒素诱导的眼内炎症反应。通过原代培养的视网膜müller细胞及视网膜微血管内皮细胞试验，结果显示激素诱导锌指状蛋白多肽通过抑制核转录因子NF‑kB p65磷酸化进而抑制p65核转移抑制内毒素诱导的炎症因子的分泌。本发明通过体内动物试验及体外细胞试验证实体外合成的激素诱导锌指状蛋白多肽具有显著的抗炎活性。可用于制备治疗炎症性疾病的药物。

技术领域

本发明属生物技术领域，涉及激素诱导锌指状蛋白多肽及其制备方法和药用用途，尤其是化学合成的激素诱导锌指状蛋白多肽在制备抑制炎症反应药物中的用途。

背景技术

现有技术公开了人体内激素作用广泛，其参与物质的新陈代谢，调控机体多个器官的生长发育及维持器官的正常功能，还参与机体应对各种刺激时的应激反应等，是维持机体内稳态不可或缺的一类重要物质；其中以糖皮质激素在临床上的应用最为广泛，研究显示了其免疫抑制能够帮助机体对抗各种原因引起的炎症反应，已成为治疗疾病、挽救生命必不可少的药物。

临床实践中，糖皮质激素被广泛的应用于治疗多种感染性及非感染性的疾病，并获得显著的临床效果，但是其伴随的药物副作用也对机体造成较为严重的损害，包括代谢紊乱、骨质疏松等。如，在眼部疾患治疗中，即使糖皮质激素局部使用也会导致严重的并发症，比如激素性青光眼，激素性白内障等，这些并发症均能导致严重的不可逆的视力损害。鉴于糖皮质激素的显著临床效果及严重的并发症，本领域技术人员拟探寻一种新型激素替代药物，使即能发挥激素的抗炎效果又无激素的药物副作用。

在1997年D'Adamio F等研究人员利用地塞米松刺激胸腺细胞研究中发现了一种具有锌指状结构的蛋白，并命名为激素诱导锌指状蛋白(GILZ)。作为一种激素诱导蛋白，GILZ的抗炎活性在多种动物模型中均被探索过，包括：利用炎症性肠病模型，发现过表达GILZ的转基因小鼠结肠部位炎症显著较野生鼠轻；GILZ过表达转基因小鼠还可以减轻脊索损伤后炎症反应，表现为在GILZ过表达的小鼠中脊索损伤部位T细胞的激活被抑制、促炎症因子如IL-1β和TNF-α的释放减少；同样在自身免疫性大脑脊髓炎的小鼠动物模型中，GILZ能够跟NF-kB相互作用减轻炎症反应；在LPS诱导的内毒素血症中GILZ过表达能通过减轻炎症因子的释放进而减轻机体炎症反应；在小鼠关节炎模型中，GILZ过表达可以模拟激素发挥抗炎效果，而Gilz-knockout鼠关节炎炎症反应显著加重；本申请的前期研究在内毒素诱导的葡萄膜炎模型中，用慢病毒过表达载体诱导视网膜GILZ过表达后显著抑制了内毒素诱导的眼内炎症反应。

综上众多试验结果均证实GILZ抑制炎症反应的活性，然而这些试验或是通过构建GILZ-/-或者GILZ overexpression转基因小鼠，或者是通过构建GILZ的overexpression或者silence质粒或者病毒载体转导细胞或者组织，由于该些技术本身具有危险性及伦理的缺陷，限制了其临床应用。

发明内容

本发明的目的在于通过体外化学合成合成新的有生物学活性的激素诱导锌指状蛋白多肽及其药用用途。

基于现有技术公开的激素诱导锌指状蛋白是一条由135个氨基酸构成的蛋白链，由于化学合成蛋白对多肽链长度得限制，在合成过程中多肽过长到常导致肽链结构异常而影响肽链的正确合成，本发明仅选取了其脯氨酸富集的结构域(第98至第135号氨基酸：KTLASPEQLEKFQSRLSPEEPAPEPETPEAPGGSAV)，在多肽的N’端接入穿膜肽YGRKKRRQRRR，然后化学合成所述的激素诱导锌指状蛋白多肽链：YGRKKRRQRRRKTLASPEQLEKFQ SRLSPEEPAPEPETPEAPGGSAV；该体外化学合成的多肽链具有很好的水溶性，能够彻底溶于水，能够促进该多肽进入细胞，PBS或者是细胞培养基，而不需要辅助任何有机溶剂，且能保证多肽的给药方式及给药途径的安全性。