[发明专利]一种黄曲霉毒素B1毒性的检测方法

权利要求书

1.一种黄曲霉毒素B1毒性的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

将成年斑马鱼按照雌雄比为1：2～1：3的比例移至产卵盒；

将产卵盒放入恒温箱中保温过夜后，自然交配并收集受精卵；

将受精卵放入恒温箱中进行恒温培养后，在解剖镜下挑选发育正常的原肠胚作为斑马鱼胚胎；

配制含有不同黄曲霉毒素B1浓度的培养液；

用含有不同黄曲霉毒素B1浓度的培养液培养斑马鱼胚胎24～120h；

观察记录斑马鱼胚胎的死亡率，以及由斑马鱼胚胎孵化的斑马鱼幼鱼的孵化率、畸形率、心包囊和卵黄囊面积、幼鱼体面积，计算心包囊/幼体面积比和卵黄囊/幼体面积比，判断黄曲霉毒素B1对斑马鱼胚胎的毒性作用；

其中，所述成年斑马鱼的饲养饵料为热带小鱼饲料和丰年虫，所述斑马鱼幼鱼的饲养饵料为草履虫。

2.如权利要求1所述的黄曲霉毒素B1毒性的检测方法，其特征在于，配制含有不同黄曲霉毒素B1浓度的培养液的步骤包括：

将二甲基亚砜与养殖用水混合，制成二甲基亚砜储备液；

将黄曲霉毒素B1加入二甲基亚砜储备液中，通过超声波破碎获得黄曲霉毒素B1母液；

向黄曲霉毒素B1母液中加入养殖用水，制成黄曲霉毒素B1储备液；

取黄曲霉毒素B1储备液与二甲基亚砜储备液和养殖用水混合，制成含有不同黄曲霉毒素B1浓度的培养液；

其中，所述养殖用水为曝气加热的自来水。

3.如权利要求2所述的黄曲霉毒素B1毒性的检测方法，其特征在于，所述超声波破碎的超声波频率为20～25kHz，超声波破碎的时间为8～10min。

4.如权利要求1所述的黄曲霉毒素B1毒性的检测方法，其特征在于，将成年斑马鱼按照雌雄比为1：2～1：3的比例移至产卵盒的步骤之前还包括：

将斑马鱼置于具有恒温循环水系统的培养缸中饲养，其中，所述培养缸中的养殖用水为曝气加热的自来水，培养缸中的水温为26～30℃，水中溶氧大于5.0mg/L，pH为6.8～7.2，保持光照12～16h/黑暗8～12h的光照周期。

5.如权利要求1所述的黄曲霉毒素B1毒性的检测方法，其特征在于，将产卵盒放入恒温箱中保温过夜后，自然交配并收集受精卵的步骤中：

所述保温过夜的温度为26～28℃，时间为10～14h。

6.如权利要求1所述的黄曲霉毒素B1毒性的检测方法，其特征在于，将受精卵放入恒温箱中进行恒温培养后，在解剖镜下挑选发育正常的原肠胚作为斑马鱼胚胎的步骤中：

所述恒温培养的温度为26～28℃，时间为2.5～3.5h。

7.如权利要求1所述的黄曲霉毒素B1毒性的检测方法，其特征在于，用含有不同黄曲霉毒素B1浓度的培养液培养斑马鱼胚胎24～120h的步骤包括：

将斑马鱼胚胎清洗后移入六孔板中；

向六孔板的孔中加入含有不同黄曲霉毒素B1浓度的培养液，放入恒温箱中恒温培养24～120h。

8.如权利要求7所述的黄曲霉毒素B1毒性的检测方法，其特征在于，向六孔板的孔中加入含有不同黄曲霉毒素B1浓度的培养液，放入恒温箱中恒温培养24～120h的步骤中：

所述恒温培养的温度为26～28℃，每隔12h更换所述培养液。