[发明专利]一种黄曲霉毒素B1毒性的检测方法

说明书

本发明公开一种黄曲霉毒素B1毒性的检测方法，包括如下步骤：配制含有不同黄曲霉毒素B1浓度的培养液；用含有不同黄曲霉毒素B1浓度的培养液培养斑马鱼胚胎24～120h；观察记录斑马鱼胚胎的死亡率，以及由斑马鱼胚胎孵化的斑马鱼幼鱼的孵化率、畸形率、心包囊和卵黄囊面积、幼鱼体面积，计算心包囊/幼体面积比和卵黄囊/幼体面积比，判断黄曲霉毒素B1对斑马鱼胚胎的毒性作用。本发明以斑马鱼为试验对象进行黄曲霉毒素B1的检测，能够快速获得大量同质性好的试验动物，降低试验成本，且容易观察中毒症状，可实时直观地观测鱼体各组织的病理变化，提高了黄曲霉毒素B1检测的效率、直观性和准确性。

技术领域

本发明涉及毒理学检测技术领域，特别涉及一种黄曲霉毒素B1毒性的检测方法。

背景技术

黄曲霉毒素(Aflatoxins，AFs)是主要由曲霉属中的黄曲霉(Aspergillusflavus)和寄生曲霉(A.parasiticus)污染谷物和谷物产品后所产生的一种次生代谢物，是一种毒性极强的剧毒物质，黄曲霉毒素的危害性在于对人体及动物肝脏有破坏作用，严重时可导致肝癌甚至死亡，已被国际癌症研究机构列为Ⅰ类致癌物质。据文献报道，已鉴定出的AFs多达20余种，其中在天然污染的食品中以黄曲霉毒素B1(AFB1)最为常见，其毒性和致癌性也最强。

有研究表明，黄曲霉毒素B1暴露能够引起人和动物多个系统的毒性效应，包括消化系统毒性、肝脏毒性、血液毒性、免疫毒性、生殖和发育毒性等。其中，发育毒性主要体现在生长迟缓、致畸作用、功能不全或异常，以及胚胎或胎仔致死作用。为了开展AFB1的毒性研究，科研人员多以大鼠、仓鼠、猪、奶牛和家禽等为试验对象，试验存在研究成本高，动物繁殖周期长、单次产仔数低而不易获得同质试验个体，不能直观展示活体组织器官病理变化，因此不适于作为AFB1毒性检测及研究的理想方法。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种黄曲霉毒素B1毒性的检测方法，旨在降低黄曲霉毒素B1毒性检测试验成本，提高黄曲霉毒素B1毒性检测的效率、直观性和准确性。

为实现上述目的，本发明提出一种黄曲霉毒素B1毒性的检测方法，包括如下步骤：

配制含有不同黄曲霉毒素B1浓度的培养液；

用含有不同黄曲霉毒素B1浓度的培养液培养斑马鱼胚胎24～120h；

观察记录斑马鱼胚胎的死亡率，以及由斑马鱼胚胎孵化的斑马鱼幼鱼的孵化率、畸形率、心包囊和卵黄囊面积、幼鱼体面积，计算心包囊/幼体面积比和卵黄囊/幼体面积比，判断黄曲霉毒素B1对斑马鱼胚胎的毒性作用。

优选地，配制含有不同黄曲霉毒素B1浓度的培养液的步骤包括：

将二甲基亚砜与养殖用水混合，制成二甲基亚砜储备液；

将黄曲霉毒素B1加入二甲基亚砜储备液中，通过超声波破碎获得黄曲霉毒素B1母液；

向黄曲霉毒素B1母液中加入养殖用水，制成黄曲霉毒素B1储备液；

取黄曲霉毒素B1储备液与二甲基亚砜储备液和养殖用水混合，制成含有不同黄曲霉毒素B1浓度的培养液；

其中，所述养殖用水为曝气加热的自来水。

优选地，所述超声波破碎的超声波频率为20～25kHz，超声波破碎的时间为8～10min。

优选地，用含有不同黄曲霉毒素B1浓度的培养液培养斑马鱼胚胎24～120h的步骤之前还包括：

将成年斑马鱼按照雌雄比为1：2～1：3的比例移至产卵盒；

将产卵盒放入恒温箱中保温过夜后，自然交配并收集受精卵；

将受精卵放入恒温箱中进行恒温培养后，在解剖镜下挑选发育正常的原肠胚作为斑马鱼胚胎。