[发明专利]一种水稻耐盐基因OsRR22突变体、其编码的氨基酸序列、植株及该突变体的创制方法

权利要求书

1.一种水稻耐盐基因OsRR22突变体，其特征在于：其核苷酸序列如 SEQ ID NO:1 所示。

2.一种如权利要求1所述水稻耐盐基因OsRR22突变体编码的多肽，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

3.一种如权利要求1所述水稻耐盐基因OsRR22突变体的创制方法，包括以下特征步骤：

S1、引导RNA靶点序列设计与选择：根据控制水稻耐盐基因OsRR22的基因组序列和CRISPR-Cas9技术的设计靶位点的原则，设计、选择并合成1个OsRR22引导RNA靶点序列；

S2、CRISPR/Cas9-gRNA载体的构建：将步骤S1中合成的引导RNA靶点序列退火形成双链，与BsaI酶切后的pYLgRNA-OsU3/LacZ连接，然后通过Golden gate cloning方法将gRNA表达盒装载到CRISPR/Cas9载体上，得到CRISPR/Cas9-gRNA载体；

S3、农杆菌介导水稻愈伤遗传转化：将步骤S2构建好的CRISPR/Cas9-gRNA载体转化到水稻品种WDR58中，获得了不含有CRISPR元件T-DNA成分的纯合OsRR22基因突变体。

4.根据权利要求3所述水稻耐盐基因OsRR22突变体的创制方法，其特征在于：在所述步骤S1中，靶位点设计在OsRR22基因的第一个外显子上；

所述步骤S1中，所述的OsRR22引导RNA靶点序列的寡核苷酸序列为：

RR22-F:5’-ggcAGAGGGATCAATTCCCCGT-3’

RR22-R:5’-aaacACGGGGAATTGATCCCTCT-3’。

5.根据权利要求3或4所述水稻耐盐基因OsRR22突变体的创制方法，其特征在于：在步骤S2中，所述Golden gate cloning方法中用到的引物为：

U3-F: 5’-TTCAGAGGTCTCTCTCGACTAGTATGGAATCGGCAGCAAAGG-3’

U3-R: 5’-AGCGTGGGTCTCGACCGACGCGTATCCATCCACTCCAAGCTC-3’。

6.根据权利要求3或4所述水稻耐盐基因OsRR22突变体的创制方法，其特征在于：所述水稻品种WDR58为秀水123///秀水123//秀水123/75-1-127，即将75-1-127与秀水123杂交，再将其后代与秀水123回交两次再自交五代所得的稳定品系。

7.根据权利要求5所述水稻耐盐基因OsRR22突变体的创制方法，其特征在于：所述水稻品种WDR58为秀水123///秀水123//秀水123/75-1-127，即将75-1-127与秀水123杂交，再将其后代与秀水123回交两次再自交五代所得的稳定品系。

8.一种水稻耐盐基因Osrr22突变体植株，其特征在于：是通过将权利要求3所述的靶点CRISPR/Cas9-sgRNA载体转化水稻愈伤组织，并转化得到的转基因植株。