[发明专利]一种金线草组织培养及快速繁殖的方法

权利要求书

1.一种金线草组织培养及快速繁殖的方法，以金线草种子为外植体，其特征在于依次经a无菌苗的获取、b不定芽的初代诱导、c芽的继代增殖、d生根培养以及e试管苗的移栽；

所述a无菌苗的获取是将消毒后的金钱草种子接种到培养基上，所用的诱导培养基为：每升含有硫酸链霉素20-50mg，蔗糖30g、琼脂7.5g，其余为MS培养基，pH为5.8-6.0，种子萌发率为60%-70%；

所述b不定芽的初代诱导是将3-5cm的无菌苗去掉叶片，剪成1-2cm，接种到诱导培养基上，在温度25±1℃、光照强度40μmol·m^-2·s^-1、光照时间12h·d^-1的条件下，培养20d，茎段外植体诱导形成新的不定芽，所用的诱导培养基为：每升1号改良MS培养基含有BAP3.0 -6.0μmol、TDZ0.1-0.5 μmol、NAA0.1-0.3 μmol、蔗糖30g、琼脂7.5g，pH为5.8-6.0，诱导系数为12.5-17.6；

所述c芽的继代增殖是将不定芽丛切开，3-4个芽为一丛，转入继代的培养基上，在温度25±1℃、光照强度50μmol·m^-2·s^-1、光照时间12h·d^-1的条件下，培养20d，丛生芽生长健壮成芽苗，增殖系数为8.7-11.4，所用的继代的培养基为：每升1号改良MS培养基含有BAP1-3μmol、NAA0.1-0.3 μmol、蔗糖30g、琼脂7.5g，pH为5.8-6.0；

所述d生根培养是将高3-4cm的芽苗分切转入生根培养基上，在温度25±1℃、光照强度50μmol·m^-2·s^-1、光照时间12h·d^-1的条件下，培养20d后，生根的试管苗形成，所述的生根培养基为：每升2号改良MS培养基或MS培养基含有IBA1.0 - 3.0 μmol、NAA2.0-5.0 μmol、蔗糖30g、琼脂7.5g，pH为5.8-6；

所述e试管苗移栽是将长好根的试管苗移栽到移栽基质中，放置于遮荫温室中培养，每隔5d浇一次Hoagland's营养液，培养10d，再将遮阴布移除，让金线草小苗得到充足光照，再培养15天，得到生长健壮的金线草幼苗；

所述b不定芽的初代诱导和c芽的继代增殖中用到的1号改良MS培养基是把国际通用的MS培养基大量元素中的NH₄NO₃成分减少到原来重量的1/2，KNO₃成分减少到原来重量的3/4，KH₂PO₄、MgSO₄·7H₂O、CaCl₂·2H₂O不变，其余微量元素、铁盐、有机成分不变；

所述d生根培养用到的2号改良MS培养基是把国际通用的MS培养基大量元素中的KNO₃、NH₄NO₃、KH₂PO₄、MgSO₄·7H₂O成分减少到原来重量的1/2，CaCl₂·2H₂O不变，其余微量元素、铁盐、有机成分不变。

2.根据权利要求1所述的一种金线草组织培养及快速繁殖的方法，其特征在于所述e试管苗移栽中的移栽基质为：珍珠岩、河沙和腐殖质按质量比1∶1∶2混合均匀。

3.根据权利要求1所述的一种金线草组织培养及快速繁殖的方法，其特征在于金线草种子的消毒处理：先用清水将种子冲洗干净，用无菌的纱布包住洗净的种子，用细线拴紧，用70%酒精浸泡30-40s，拿出用无菌水冲洗3-4遍，再使用10%双氧水溶液消毒12-15分钟，无菌水冲洗4-6遍，得到消毒后的外植体种子。

4.根据权利要求1所述的一种金线草组织培养及快速繁殖的方法，其特征在于所述的金线草种子为11月晴朗的上午采集到的野生金线草种子。