[发明专利]一种金线草组织培养及快速繁殖的方法

说明书

本发明公开了一种金线草组织培养及快速繁殖的方法，以金线草种子为外植体，通过筛选和优化初代诱导、继代增殖、生根和移栽培养基配方和培养条件，经过无菌苗获取、不定芽的初代诱导、继代增殖和生根培养以及试管苗的移栽阶段，通过采用特定的改良MS培养基实现药用植物金线草种苗的快速繁殖，一般只需80‑85天就可以获得金线草的幼苗，并且金线草幼苗的成活率可达90％以上，从而为该物种的遗传改良、种质资源保护和开发利用奠定基础。

技术领域：

本发明属于植物繁殖领域，具体涉及一种金线草组织培养及快速繁殖的方法。

背景技术：

金线草(Antenoron filiforme)，别名毛蓼、山蓼、一串红、铁拳头、红花铁菱角、蓼子七、鸡心七、九龙盘。是蓼科金线草属多年生草本，金线草分布于山西、陕西、山东、安徽、江苏、浙江、江西、河南、湖北、广东、广西、四川、贵州等地。秋季采全草，割下茎叶，分别晒干备用，以根或全草入药。具有凉血止血，清热利湿，散瘀止痛之功效。用于吐血，肺结核咯血，子宫出血，淋巴结结核，胃痛，痢疾，跌打损伤，骨折，风湿痹痛，腰痛。近来年，金线草越来越受到人们的青睐，在园林景观和药用上得到广泛的应用。

然而，目前国内外许多学者和专家对其研究集中于药用成分和药用功效方面，而在生物特性、组织培养和快速繁殖等方面相关研究甚少，国内外均未见报道。

发明内容：

本发明的目的是提供一种成活率高，能快速繁殖并能大量得到金线草幼苗的金线草组织培养及快速繁殖的方法。该发明具有简单、快速、有效的特性，可直接运用于该物种的繁育和保护，具有可操作性，环保性以及发明的先进性。

为实现发明目的，本发明采取如下的技术方案：

一种金线草组织培养及快速繁殖的方法，以金线草种子为外植体，依次经a无菌苗的获取、b不定芽的初代诱导、c芽的继代增殖、d生根培养以及e试管苗的移栽，所述的b不定芽的初代诱导是将3-5cm的无菌苗去掉叶片，剪成1-2cm左右，接种到诱导培养基上，在温度25±1℃、光照强度40μmol·m^-2·s^-1、光照时间12h·d^-1的条件下，培养20d，茎段外植体诱导形成新的不定芽，所用的诱导培养基为：每升1号改良MS培养基含有BAP(苄氨基嘌呤)3.0-6.0μmol、TDZ(N-苯基-N′-1，2，3-噻二唑-5-脲)0.1-0.5μmol、NAA(萘乙酸)0.1-0.3μmol、蔗糖30g、琼脂7.5g，pH为5.8-6.0，诱导系数为12.5-17.6。

作为优选，所述a无菌苗的获取是将消毒后的金钱草种子接种到培养基上，在温度25±1℃、光照强度40μmol·m^-2·s^-1、光照时间12h·d^-1的条件下，培养20-30d，种子萌发长成约3-5cm的种苗，所用的培养基为：每升含有硫酸链霉素20-50mg，蔗糖30g、琼脂7.5g，其余为MS培养基，pH为5.8-6.0，种子萌发率约为60％-70％。

作为优选，所述c芽的继代增殖是将不定芽丛切开，3-4个芽为一丛(注意不用接种单个芽，单个芽容易死亡)，转入继代的培养基上，在温度25±1℃、光照强度50μmol·m^-2·s^-1、光照时间12h·d^-1的条件下，培养20d，从生芽生长健壮成芽苗，增殖系数为8.7-11.4，所用的继代的培养基为：将BAP(苄氨基嘌呤)1-3μmol、NAA(萘乙酸)0.1-0.3μmol、蔗糖30g、琼脂7.5g溶于1号改良MS培养基中，pH为5.8-6.0，21℃灭菌20min后得到增殖培养基。