[发明专利]一种肠道和粪便中短链脂肪酸的检测方法

说明书

本发明公开了一种肠道和粪便中短链脂肪酸的固相动态微萃取气质联用检测方法，包括以下步骤：称取肠道内容物40mg或粪便100mg，置于顶空瓶中，加入纯水1ml，涡旋振荡混匀；将所得的样品用于固相动态微萃取后用于气相色谱和质谱分析；并建立标准曲线进行定量分析。本发明的方法简化了样品的前处理步骤。只需将样本在纯水中均质，SPDE直接进行萃取，气相色谱与质谱联用分析，不需其他前处理步骤，能显著缩短测定时间，减轻实验工作量。本发明的方法的日内精密度RSD在5.29～9.92％，检出限在0.5～5μg·Kg^‑1，最小测定限在1～20μg·Kg^‑1。

技术领域

本发明属于分析化学领域,涉及肠道和粪便中短链脂肪酸的检测方法,尤其涉及肠道和粪便中短链脂肪酸的固相动态微萃取的气相色谱和质谱联用的定量检测方法。

背景技术

短链脂肪酸是指碳链中碳原子数目小于6个的有机脂肪酸,主要包含八种,分别是乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸、己酸和异己酸。生物体内的短链脂肪酸主要为乙酸、丙酸和丁酸,约占短链脂肪酸总量的90～95％,这3种短链脂肪酸是结肠中主要的阴离子,可以促进水和钠的吸收,是结肠细胞氧化的燃料。

临床研究表明,短链脂肪酸具有调节肠道菌群平衡、改善肠道功能,以及抗肿瘤、抗炎和调控基因表达的作用。肠道中不同种属类型的细菌产生的短链脂肪酸的种类和数量各不相同,主要检测生物样品(主要是血液、尿液、粪便、肠道内容物、细胞培养液)中的短链脂肪酸的含量,可以反应肠道中肠道菌群的变化,可辅助临床疾病的诊断、治疗。因此,建立经济、快速、简便的短链脂肪酸的定量和定性检测方法、提高检测方法的灵敏度与扩大检测方法的样品应用范围极具意义。

发明内容

本发明目的在于提供一种简单、快速和准确的肠道和粪便中短链脂肪酸的固相动态微萃取的气相色谱和质谱联用的检测方法,尤其是一种简单、快速和准确的肠道和粪便中短链脂肪酸的固相动态微萃取的气相色谱和质谱联用的定量检测方法。

本发明提出的一种肠道和粪便中短链脂肪酸的固相动态微萃取气质联用检测方法,具体包括如下步骤:

(1)称取肠道内容物40mg或粪便100mg,置于顶空瓶中,加入纯水1ml,涡旋振荡混匀；

(2)将步骤(1)所得的样品用于固相动态微萃取；

(3)将步骤(2)所得的产物用于气相色谱分析,条件为:色谱柱为VF-WAX ms,0.25mm×30m,0.25μm；升温程序为:初始温度70℃,保持l min,按10℃/min升温速率升温至200℃,保持2min,30℃/min升温速率升温至240℃,保持2min,进样口温度为250℃；载气是高纯度氦气,恒压进样,压力为14.135psi流速为1.0mL/min,进样方式为不分流模式；

(4)将步骤(3)所得产物用于质谱分析,条件为:扫描范围m/z:30—300,溶剂延迟时间7分钟,传输线、离子源温度分别是250,300℃,倍增器电压值为1853V；

(5)标准曲线的建立,分别称取乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸和戊酸这6种短链脂肪酸,加入纯水定容,配置短链脂肪酸的对照品溶液,用峰面积对应样品浓度绘制标准曲线。

本发明中,步骤(1)固相动态微萃取的条件具体为:使用SPNd1-WAX-5056的萃取针头、萃取次数50次、预热平衡时间为3分钟、预热平衡温度90℃、萃取针温度95℃、萃取流速200μl/s、解析流速25μl/s、解析气体体积为1ml。

本发明中,所述短链脂肪酸为乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸和戊酸。

本发明中,步骤(1)固相动态微萃取采用的萃取头涂层为聚乙二醇。